sRAGE对PCOS卵巢颗粒细胞VEGF的调控作用研究

发布时间：2017-06-21 21:05

  本文关键词：sRAGE对PCOS卵巢颗粒细胞VEGF的调控作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是常见的一种生殖内分泌疾病,影响着约6%的生育期妇女,它可导致排卵障碍、生育力下降、胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和高雄激素血症等一系列症状,至今发病机制尚不清楚。有研究认为PCOS可能存在血管生成调节机制的失调,彩色多普勒超声显像发现PCOS妇女的卵巢基质血流增加。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种强效的血管生成因子,其在卵巢黄素化颗粒细胞、卵巢基质细胞及子宫内膜细胞中均有表达,可调节女性生殖系统血管的周期性生成和血管通透性,且PCOS患者卵泡液及卵巢组织中VEGF的表达均升高,推测VEGF通过影响血管生成参与了PCOS的病理生理过程。可溶性晚期糖基化终产物受体(soluble receptor for advanced glycation end-products,s RAGE)是晚期糖基化终产物受体(RAGE)的内源分泌型。s RAGE与RAGE竞争性地与配体AGEs结合,阻断RAGE激活的下游细胞信号通路,因此被称为“诱饵受体”。近年来研究表明s RAGE与慢性炎症反应、胰岛素抵抗和卵巢储备功能密切相关,提示s RAGE可能参与了PCOS的发生。本课题组前期研究发现:PCOS患者血液和卵泡液中s RAGE浓度均低于非PCOS患者,且PCOS患者卵泡液s RAGE水平与VEGF水平呈负相关。因此,我们推测s RAGE可能通过降低VEGF表达而影响PCOS的发生发展,但具体的机制尚需进一步研究。双调蛋白(amphiregulin,AREG)、β细胞素(betacellulin,BTC)和表皮调节素(epiregulin,EREG)是表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)家族的三个成员,因其结构功能与EGF相似被称为EGF相关生长因子。EGF家族及其受体家族(Erb B家族)在女性生殖活动中具有重要作用,通过旁分泌和(或)自分泌的作用参与卵巢生殖活动。研究证实这些因子在多种细胞中可以促进VEGF表达。那么在PCOS卵巢颗粒细胞中s RAGE能否降低EGF相关生长因子的表达,从而通过阻断EGF相关生长因子通路降低VEGF合成,本实验将就这一问题进行初步研究。目的1.测定不同浓度的s RAGE在PCOS卵巢颗粒细胞中对VEGF表达的调控作用。2.探讨s RAGE在PCOS卵巢颗粒细胞中是否能通过阻断EGF相关生长因子通路参与对VEGF表达的调控作用。材料与方法选取10例于2015年03月-2015年06月期间在郑州大学第一附属医院生殖医学中心进行体外受精(in vitro fertilization,IVF)助孕治疗的PCOS患者的颗粒细胞为研究对象。收集患者经阴道超声取卵时获得的所有卵泡液,提取卵巢颗粒细胞行体外培养,培养48h后将每例颗粒细胞分为四组,分别加入含有不同浓度的s RAGE(0μg/ml,0.6μg/ml,0.9μg/ml,1.2μg/ml)的培养基继续培养颗粒细胞24h。PCOS卵巢颗粒细胞经s RAGE干预培养后分为两份,其中一份采用Trizol法提取总RNA,然后经实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)测定VEGF和EGF相关因子(AREG、BTC及EREG)m RNA的表达;另一份采用蛋白质印迹法(Western blot)检测VEGF蛋白的表达。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测卵巢颗粒细胞培养液中EGF相关因子:AREG、BTC和EREG蛋白的表达。结果1.0μg/ml,0.6μg/ml,0.9μg/ml,1.2μg/ml s RAGE浓度组,VEGF m RNA相对表达量分别为1.349±0.347,0.817±0.163,0.472±0.101,0.321±0.106,VEGF m RNA表达水平随s RAGE浓度增加而降低,四组之间的差异有统计学意义(P0.05)。2.0μg/ml,0.6μg/ml,0.9μg/ml,1.2μg/ml s RAGE浓度组,VEGF蛋白相对表达量分别为0.49±0.037,0.335±0.018,0.120±0.012,0.102±0.005,VEGF蛋白表达水平随s RAGE浓度增加而降低,四组之间的差异有统计学意义(P0.05)。3.PCOS卵巢颗粒细胞经s RAGE干预后,AREG、BTC和EREG m RNA的表达水平均降低,且三者的m RNA表达水平均随s RAGE浓度的增高而降低,四个浓度组之间的差异均有统计学意义(P0.05)。4.PCOS卵巢颗粒细胞经s RAGE干预后,AREG、BTC和EREG蛋白的表达水平均降低,且三者的蛋白表达水平均随s RAGE浓度的增高而降低,四个浓度组之间的差异均有统计学意义(P0.05)。结论1.s RAGE在PCOS卵巢颗粒细胞中可降低VEGF m RNA的表达和蛋白的合成,且呈剂量依赖性。2.在PCOS卵巢颗粒细胞中,s RAGE可通过阻断EGF相关生长因子通路参与对VEGF的调控作用。
【关键词】：多囊卵巢综合征 可溶性晚期糖基化终产物受体 血管内皮生长因子 EGF相关生长因子 颗粒细胞
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711.75
【目录】：

• 摘要4-7
• abstract7-12
• 缩略词表12-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-27
• 结果27-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述 多囊卵巢综合征与血管内皮生长因子的研究进展43-57
• 参考文献52-57
• 个人简历及攻读硕士期间发表论文57-58
• 致谢58

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本文编号：469889