人乳头瘤病毒PCR-金磁微粒层析快速检测方法的建立

发布时间：2017-06-23 16:08

  本文关键词：人乳头瘤病毒PCR-金磁微粒层析快速检测方法的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：宫颈癌是全球女性常见的恶性肿瘤。高危型人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是宫颈癌发生的主要诱因,其病毒DNA的检测对于宫颈癌筛查和预防具有重要意义。基于PCR-金磁微粒层析原理,本研究建立了快速检测HPV病毒的方法。对HPV病毒通用引物GP5+/6+进行相应的标记,PCR扩增HPV病毒DNA目的片段,扩增产物以构建的金磁微粒层析装置进行检测,结果以目视化方式读取。该方法对110例宫颈脱落细胞样本进行检测,结果与PCR-反向点杂交法进行对比。结果表明,对于110例宫颈脱落细胞样本,PCR-金磁微粒层析法与PCR-反向点杂交法的检测结果的一致率为85.5%(94/110),阴性样本一致率为94.2%(65/69),阳性样本一致率为70.7%(29/41),Kappa值为0.676。对阴性样本检测结果表明方法具有较好的特异性。对临床阳性样本检测结果也达到文献报道的HPV筛查方法检出率的水平。因此,PCR-金磁微粒层析法是一种快速、操作简便、成本低廉的HPV病毒DNA检测方法,在进一步提高PCR-金磁微粒层析方法灵敏度的基础上,该方法对于宫颈癌筛查具有广泛的应用前景。
【关键词】：HPV DNA检测 GP5+/6+PCR 层析试纸 宫颈癌筛查
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R440;R737.33
【目录】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章：绪论7-19
• 1.1 HPV病毒简介7
• 1.2 HPV病毒的分类7-8
• 1.3 HPV病毒致病机理8-10
• 1.4 宫颈癌的预防10-12
• 1.5 HPV病毒常用检测方法12-17
• 1.6 论文的立题及意义17-19
• 第二章：HPV病毒PCR-金磁微粒层析检测法的初步建立19-35
• 2.1 实验原理19-20
• 2.2 实验材料20-23
• 2.2.1 主要试剂20-21
• 2.2.2 主要仪器21
• 2.2.3 溶液配制21-22
• 2.2.4 临床样本22-23
• 2.2.5 数据统计23
• 2.3 实验内容23-33
• 2.3.1 HPV病毒DNA粗提与纯化23-25
• 2.3.2 HPV病毒DNA裂解方法的优化25-27
• 2.3.3 PCR扩增通用引物的选择27-31
• 2.3.4 样本检测及质粒评价31-33
• 2.4 本章小结33-35
• 第三章：尿嘧啶糖苷酶防污染系统的PCR-金磁微粒层析法的建立35-46
• 3.1 实验原理35
• 3.2 实验材料35
• 3.2.1 主要试剂35
• 3.2.2 主要仪器35
• 3.3 实验优化35-38
• 3.3.1 HotMaster酶体系与Taq酶体系的比较35-36
• 3.3.2 体系体积的优化36
• 3.3.3 引物浓度的选择36
• 3.3.4 模板预变性的优化36
• 3.3.5 模板用量的比较36-37
• 3.3.6 两步法PCR与三步法PCR的比较37
• 3.3.7 三步法PCR程序时间的比较37-38
• 3.3.8 循环数的优化38
• 3.3.9 MgCl2浓度的优化38
• 3.4 结果与讨论38-44
• 3.4.1 HotMaster酶体系与Taq酶体系的比较38-39
• 3.4.2 体系体积的优化39
• 3.4.3 模板预变性的优化39-40
• 3.4.4 引物浓度的选择40-41
• 3.4.5 模板用量的比较41
• 3.4.6 两步法PCR与三步法PCR的比较41-42
• 3.4.7 三步法PCR程序时间的比较42
• 3.4.8 循环数的优化42-44
• 3.4.9 MgCl2浓度的优化44
• 3.5 体系确定44
• 3.6 临床样本检测44-46
• 全文总结46-48
• 参考文献48-57
• 附录57-58
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果58-59
• 致谢59

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