SARI和PC4在宫颈癌细胞生长中的作用与机制的研究

发布时间：2017-06-25 06:12

  本文关键词：SARI和PC4在宫颈癌细胞生长中的作用与机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的宫颈癌作为高发的恶性肿瘤严重危害着女性的生殖健康,目前宫颈癌的发病率在全球女性恶性肿瘤中位居第四,在发展中国家宫颈癌的死亡率居女性恶性肿瘤死亡率的首位。根据2015年NCCN发布的宫颈癌临床指南中显示宫颈癌的治疗仍然以患者的手术切除为主,以放疗、化疗为辅助治疗手段,对于不同病程的患者采取的主要治疗策略也有所不同,所以在临床治疗中宫颈癌的早期诊断、治疗策略的效果评估和预后的追踪检测显得尤为重要。与其他肿瘤相比,宫颈癌存在一段较长时间的癌前病变过程,且在此期间无明显的临床症状,现阶段病理诊断及肿瘤分子标志物的应用对患者进行预后评估的准确性相对较差,因此明确宫颈癌的发生、发展、侵袭、转移的分子生物学基础对探索有效的肿瘤标记物有重要价值。SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)又称BATF2(basic leucine zipper transcription factor,ATF-like 2)。正常表达于人体多种组织中,在肿瘤发生过程中可以作为抑癌基因发挥抑制肿瘤生长的功能。SARI在乳腺、前列腺上皮细胞等正常组织中表达明显高于其肿瘤组织,其表达水平与肿瘤的发生、发展有明显的相关性,也有研究发现SARI低表达可以促进肿瘤的转移和侵袭过程。以上研究均表明在细胞发生恶性转化、增殖的过程中SARI表达水平下调,提示SARI可能抑制肿瘤细胞的发生和发展。PC4(positive coactivator4)是存在于细胞核内的一种辅助转录因子,可以参与细胞内DNA转录、修复等多种表达调控过程。有研究发现PC4在多种肿瘤组织中(如食管癌、乳腺癌及肺癌等)表达显著升高,并发现PC4的高表达与肿瘤的转移、放疗抵抗等密切相关。以上研究均表明在细胞发生恶性转化、增殖过程中PC4表达水平上调,提示PC4可能促进了肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。无论是抑癌基因SARI或是促癌基因PC4,在多种正常组织与肿瘤组织中的表达量均存在显著差异,并且与肿瘤的发生、发展密切相关。然而在宫颈癌中SARI或PC4的生物学功能及相关分子机制尚未见报道。故本研究以宫颈癌细胞为研究对象,以探究SARI和PC4对宫颈癌细胞生长的影响为主要目的,并通过阐明其表达调控的部分机制,为进一步探究宫颈癌的发生、发展、侵袭、转移的分子生物学基础提供理论依据。研究方法:第一部分SARI在宫颈癌细胞生长中的作用与机制的研究首先通过Real-time PCR检测SARI在宫颈癌临床样本中的表达特点;然后在HeLa和CaSki细胞转染SARI的表达质粒上调SARI的表达水平;使用Real-time PCR和Western blot检测转染SARI的表达质粒后SARI表达水平的变化;CCK-8法检测宫颈癌细胞SARI表达上调后对细胞生长的影响;流式细胞术分析上调SARI后细胞的周期和凋亡;报告基因检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot检测抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2的表达。第二部分PC4在宫颈癌细胞生长中的作用与机制的研究首先通过Real-time PCR检测PC4在宫颈癌临床样本和宫颈癌细胞系中的表达特点;然后采用RNA干扰技术下调HeLa和CaSki细胞中PC4表达;使用Real-time PCR和Western blot检测上述宫颈癌细胞中沉默PC4后PC4表达水平的变化;CCK-8法检测宫颈癌细胞PC4表达水平的改变对细胞生长的影响;流式细胞技术分析沉默PC4后的细胞周期;Western blot检测在沉默PC4后宫颈癌细胞中PARP及抗凋亡相关分子的表达水平的变化;通过Real-time PCR、Western blot等实验探索相关分子信号通路对PC4表达的调控。研究结果:1.SARI在宫颈癌组织中低表达。SARI表达水平上调后,细胞生长活性受到抑制,凋亡细胞增加但对细胞周期没有明显影响。上调SARI的表达对AP-1的转录活性产生抑制,下调了抗凋亡分子Mcl-1的表达水平,但对Bcl-2的表达水平没有产生显著的影响。2.PC4在宫颈癌组织中高表达。PC4表达水平下调后,宫颈癌细胞的生长受到抑制,细胞周期发生阻滞且细胞发生凋亡,检测相关分子发现PARP发生剪切,抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2表达均下调。PC4在宫颈癌细胞中的表达水平与E6癌蛋白的表达相关;E6原癌蛋白可以下调p53的表达并上调PC4的表达;抑癌因子p53可以抑制PC4的表达。结论:1.上调SARI使宫颈癌细胞的生长活性受到抑制,细胞发生凋亡。且在宫颈癌中SARI的这种抑制肿瘤细胞生长的功能可能是由于对AP-1的转录活性产生抑制进而通过抗凋亡分子Mcl-1表达的下调来实现的;2.在宫颈癌细胞中沉默PC4可以抑制肿瘤细胞的生长,使肿瘤细胞的周期阻滞在G1期,且可能通过下调抗凋亡分子Mcl-1、Bcl-2的表达来诱导宫颈癌细胞发生凋亡;E6原癌蛋白可以下调p53并释放p53对PC4的抑制作用使PC4表达上调进而促进肿瘤细胞的生长。
【关键词】：宫颈癌 PC4 SARI 细胞生长 细胞凋亡
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 SARI在宫颈癌细胞生长中的作用与机制的研究13-31
• 2.1 材料13-16
• 2.2 方法16-24
• 2.3 结果24-28
• 2.4 讨论28-30
• 2.5 小结30-31
• 第三章 PC4在宫颈癌细胞生长中的作用与机制的研究31-54
• 3.1 材料31-34
• 3.2 方法34-42
• 3.3 结果42-51
• 3.4 讨论51-53
• 3.5 小结53-54
• 全文总结54-55
• 参考文献55-61
• 文献综述 宫颈癌中肿瘤分子标志物和研究进展61-70
• 参考文献66-70
• 攻读硕士学位期间发表论文情况70-71
• 致谢71

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本文编号：481052