Tspan-5在正常妊娠维持和妊娠滋养细胞疾病诊治中的作用

发布时间：2017-07-06 08:19

  本文关键词：Tspan-5在正常妊娠维持和妊娠滋养细胞疾病诊治中的作用

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【摘要】：目的:研究Tspan-5对滋养细胞增殖和迁移能力的影响,检测Tspan-5在母胎界面的表达情况,检测靶向Tspan-5基因沉默后滋养细胞分泌hCG的情况以及对化疗药物氨甲蝶呤(MTX)治疗效果的变化情况,探讨Tspan-5对正常妊娠维持的作用,及其作为诊断妊娠滋养细胞疾病有效标记物的可能性,寻求治疗妊娠滋养细胞疾病的新靶点。方法:第一章:(1)通过RNAi技术沉默人绒毛膜癌细胞株JEG-3中Tspan-5的表达,用Western Blotting技术检测干扰后JEG-3细胞中Tspan-5的表达情况,计算干扰效率;(2)用平板克隆形成实验、CCK-8实验检测干扰前后JEG-3细胞的增殖能力;(3)用划痕实验检测干扰前后JEG-3细胞的迁移能力。第二章:收集正常早孕、自然流产及输卵管妊娠的绒毛和蜕膜组织,以及输卵管妊娠的输卵管粘膜组织,以WesternBlotting技术检测其中Tspan-5的表达水平。第三章:(1)用CCK-8实验检测在不同组JEG-3细胞中加入氨甲蝶呤后的增殖情况;(2)用罗氏电化学发光全自动免疫分析系统检测各组JEG-3细胞培养液中h CG的水平。结果:第一章:(1)不同si RNA干扰JEG-3细胞后Western Blotting结果显示:Tspan5/NC条带灰度值最高,Tspan5/1005最低,干扰后Tspan-5的相对表达量从低到高依次为:Tspan5/1005Tspan5/796Tspan5/464Tspan5/NC,因此选择Tspan5/1005作为干扰组完成后续实验;(2)平板克隆形成实验结果:干扰组(Tspan5/1005)JEG-3细胞形成的克隆个数较对照组(Tspan5/NC)明显减少(148±23 vs 276±31,P0.01),未干扰组与对照组之间的JEG-3细胞克隆个数无明显差异(328±39 vs 276±31,P0.1);(3)CCK-8实验结果:未干扰组JEG-3细胞增殖活力最高,对照组(Tspan5/NC)JEG-3细胞增殖活力稍低于未干扰组,但两者无明显差异(1.200±0.103 vs 1.185±0.022,P0.05);与对照组(Tspan5/NC)相比,干扰组(Tspan5/1005)JEG-3细胞增殖活力明显下降(1.185±0.022 vs 1.076±0.028,P0.01);(4)划痕实验结果:干扰组(Tspan5/1005)划痕后24小时的划痕宽度减去划痕时的划痕宽度的绝对值明显小于对照组(Tspan5/NC)(1.27±0.03cm vs 1.97±0.38cm,P0.05)。第二章:(1)自然流产组绒毛中Tspan-5表达量小于正常早孕组绒毛中的表达量,但自然流产组蜕膜中Tspan-5表达量与正常早孕组蜕膜中表达量无明显差异。(2)输卵管妊娠组绒毛及蜕膜中Tspan-5表达量与正常早孕组均无明显差异;(3)输卵管妊娠时输卵管粘膜中Tspan-5表达量与蜕膜中的表达量无明显差异;(4)输卵管妊娠组输卵管粘膜中Tspan-5的表达量明显高于正常早孕组蜕膜中的表达量(1.62±0.47 vs 0.82±0.15,P0.01)。第三章:(1)总体来看,各组JEG-3细胞培养液中的HCG浓度随着培养时间的延长而逐渐升高,在培养72h后干扰组(Tspan5/1005)JEG-3细胞培养液中HCG浓度较对照组(Tspan5/NC)明显升高(699.3±85.2 IU/L vs 507.0±130.2 IU/L,P0.05),但此时未干扰组h CG浓度与对照组(Tspan5/NC)相比无明显差异;干扰组与对照组在培养0h、24h及48h相比其h CG浓度均无明显差异;(2)未添加MTX的干扰组(Tspan5/1005)的JEG-3细胞数稍降低后又再次升高;添加MTX后各组JEG-3细胞数均随着MTX作用时间延长而逐渐减少,在加入MTX 24h后干扰组(Tspan5/1005)JEG-3细胞数较对照组(Tspan5/NC)明显减少(0.817±0.039 vs 1.021±0.042,P0.01),添加MTX的干扰组(Tspan5/1005)的JEG-3细胞数与未添加MTX的干扰组(Tspan5/1005)相比明显减少(0.817±0.039vs 1.066±0.023,P0.01),但未干扰组JEG-3细胞数与对照组(Tspan5/NC)相比无明显差异;在加入MTX 0h、48h及72h,干扰组与对照组的JEG-3细胞数均无明显差异。结论:(1)本研究发现降调JEG-3细胞中Tspan-5的表达后,滋养细胞的增殖和迁移能力也随之减弱。(2)综合本实验与我们前期实验结果,Tspan-5主要表达于具有侵袭力的绒毛外滋养细胞和细胞滋养细胞,且Tspan-5表达量的多少与绒癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力呈正相关,因此Tspan-5有希望作为诊断和监测妊娠滋养细胞疾病的标记物。(3)Tspan-5在母胎界面中表达,在自然流产绒毛中的表达水平低于正常早孕绒毛,提示自然流产绒毛的增殖、侵袭力下降。(4)输卵管妊娠的输卵管粘膜中也有Tspan-5的表达,且输卵管妊娠时输卵管粘膜Tspan-5的表达量高于正常早孕中蜕膜的表达量,是否提示输卵管妊娠时输卵管粘膜比正常蜕膜细胞有更强的增殖/粘附能力?仍需进一步深入研究。(5)沉默Tspan-5基因后,化疗药物MTX能更迅速地抑制绒癌细胞增殖,因此Tspan-5有望成为临床治疗妊娠滋养细胞疾病的新靶点。
【关键词】：四分子交联体Tspan-5 妊娠维持 妊娠滋养细胞疾病 诊治 标记物
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-15
• 前言15-16
• 实验仪器、试剂与耗材16-19
• 第一章 沉默Tspan-5 的表达对绒毛膜癌细胞JEG-3 增殖和迁移的影响19-31
• 引言19
• 实验方法19-25
• 实验结果25-28
• 讨论28-31
• 第二章 Tspan-5 在母胎界面的表达水平及其对正常妊娠维持的作用31-40
• 引言31
• 实验方法31-33
• 实验结果33-37
• 讨论37-40
• 第三章 Tspan-5 在妊娠滋养细胞疾病诊治中的作用40-48
• 引言40
• 实验方法40-42
• 实验结果42-44
• 讨论44-48
• 全文结论48
• 展望48-49
• 参考文献49-54
• 附录:综述54-64
• 参考文献61-64
• 中英文缩写词对照表64-65
• 攻读硕士期间科研成果65-66
• 致谢66

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1 汤海瑜;Tspan-5在正常妊娠维持和妊娠滋养细胞疾病诊治中的作用[D];南华大学;2016年

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本文编号：525430