新合成氮杂查尔酮类衍生物对宫颈癌细胞生长抑制及化疗增敏作用

发布时间：2017-08-04 04:06

  本文关键词：新合成氮杂查尔酮类衍生物对宫颈癌细胞生长抑制及化疗增敏作用

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【摘要】：背景及目的宫颈癌仍是目前导致妇女死亡的主要原因之一,高危型HPV的持续感染是其主要发病因素,尽管随着早期的筛查及先进的医疗技术的发展,宫颈癌的发生率及死亡率有所下降,但仍存在晚期及转移的宫颈癌患者的预后较差的情况,主要在于细胞毒药物对宫颈癌治疗效果不显著。目前,顺铂联合紫杉醇的化疗方案是治疗晚期宫颈癌的主要手段,可延长患者总生存期3个月,一旦治疗失败,缺乏二线或三线药物;并且,多种类型的化疗药物相结合使用后耐药等副作用现象仍不能有效的避免。因此,很有必要开发新的能够增加宫颈癌化疗敏感性的生物活性制剂。天然的黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的多酚类次生代谢产物,具有2-苯基色原酮结构,在大多数的自然植物中含量丰富,分子结构多样复杂,可分为:黄酮、黄酮醇、黄烷酮、黄烷酮醇、查尔酮、异黄酮、异黄酮醇、橙酮及黄烷、黄烷醇等多种类型,具有抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗心血管疾病、抗肿瘤、镇痛、调节肿瘤耐药性以及增强免疫调节功能的多重药理学活性。黄酮类化合物对许多恶性肿瘤的体内外生长都有明显抑制作用,对其治疗机制的研究也越来越受到关注,天然的黄酮类物质种类多样,多以结合体的形式存在,提取过程较复杂,近年也不断有合成的黄酮类物质问世。本研究使用新合成的氮杂查尔酮衍生物单独或联合奈达铂,体外观察其抑制宫颈癌Hela及Siha细胞的生长作用及其对奈达铂的增敏效应,本研究证实了新合成的黄酮类化合物具有明显的抗宫颈癌细胞增殖以及增敏效应。材料及方法我们合成了七个具有长链共轭结构新型氮杂查尔酮衍生物,并对其进行了活性测定及结构表征;MTT法检测7种化合物分别对宫颈癌Hela细胞的生长抑制效果,根据其抑制率(IC50值)进行初筛,选择IC50值最低的1个化合物作为下一步的实验药物,进一步观察其对He La、Siha及Ha Ca T细胞的生长抑制作用及对奈达铂的增敏效应。划痕实验观察所选化合物对癌细胞的迁徙抑制效应,倒置相差显微镜下观察并拍照记录不同浓度化合处理细胞24小时后形态的改变,流式细胞仪技术检测化合物对细胞周期、凋亡的影响,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测化合物对宫颈癌细胞中p53蛋白水平的影响。结果1.新合成的化合物对Hela细胞的抑制效果:7种化合物均不同程度的抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性(IC50值为14.133μM-173.236μM),抑制强度依次为10g号、10f号、10b号、10a号、10d号、10e号、10c号。2.10g号化合物对Hela、Siha和Ha Ca T细胞的抑制效应:10g号化合物对He La及Siha具有明显的生长抑制效应,且呈浓度依赖性,对Hela(IC50=14.133μM)细胞的抑制效应较Siha(IC50=18.281μM)明显,而对Ha Ca T(IC50=243.751μM)细胞只在较高的浓度时才表现出温和的细胞毒性,(P0.05)。3.10g号化合物对奈达铂的增敏效果:用含2μM的10g号化合物的不同浓度的奈达铂处理Hela与Siha细胞48小时,在低浓度时其抑制率明显高于单独使用奈达铂时,对Hela(IC50 NDP:2.878ng/L;NDP+10g:0.937 ng/L)的增敏效果强于Siha(IC50 NDP:11.204 ng/L;NDP+10g:5.927 ng/L)。4.10g号化合物对细胞迁徙的影响:用15μM的10g号化合物处理Hela、Siha及Ha Ca T细胞株24小时后,化合物对细胞的迁徙抑制作用为:HelaSihaHa Ca T。5.10g号化合物对细胞形态的影响:分别用不同浓度的10g号化合物处理Hela、Siha及Ha Ca T细胞株24小时后,倒置相差显微镜下发现随着化合物浓度的增加宫颈癌细胞形态逐渐趋于漂浮、死亡,Ha Ca T细胞无明显变化。6.10g号化合物对细胞周期及凋亡的影响:15μM的10g号化合物对Hela、Siha及Ha Ca T细胞株24小时后,流式细胞仪技术检测发现Hela及Siha细胞周期明显阻滞在G0/G1期,24小时后的He La、Siha及Ha Ca T的凋亡率((12.483±0.49)%、(1.819±0.78)%、(0.785±0.32)%)显著高于对照组((0.882±0.81)%、(0.820±0.21)%、(0.084±0.41)%),P值均小于0.05。7.10g号化合物对宫颈癌细胞P53蛋白表达水平的影响:15μM 10g号化合物的细胞培养液处理宫颈癌Hela及Si Ha细胞24小时后,He La及Siha细胞中P53蛋白的相对表达量实验组(0.71±0.095、1.02±1.134)较对照组(0.53±0.071、0.69±0.109)明显增高,p0.01。结论1.新合成的7个氮杂查尔酮衍生物均对He La细胞的增殖具有抑制作用。2.10g号化合物对HPV18阳性的Hela细胞的抑制作用强于对HPV16阳性的Siha细胞,对人正常的HPV阴性的永生化表皮细胞Ha Ca T有温和的细胞毒性。3.10g号化合物可以明显增加宫颈癌细胞株对奈达铂低浓度时的化疗增敏作用。4.新合成的氮杂查尔酮衍生物可能是通过上调野生型P53蛋白的表达来促进宫颈癌凋亡、抑制细胞恶性增殖的。
【关键词】：宫颈癌细胞 HPV 黄酮类化合物 增敏 氮杂查尔酮
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-15
• 前言15-17
• 材料与方法17-25
• 结果25-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 展望33-34
• 附图34-38
• 参考文献38-43
• 综述 黄酮类化合物抗癌作用的研究进展43-62
• 参考文献56-62
• 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果62-63
• 致谢63

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