GPER基因羟甲基化调控在胰岛素诱导子宫内膜异常增生中的作用及机制

发布时间：2017-08-09 07:13

  本文关键词：GPER基因羟甲基化调控在胰岛素诱导子宫内膜异常增生中的作用及机制

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【摘要】：目的:探讨子宫内膜癌细胞系Hec-1a和Ishikawa中胰岛素对GPER表达水平的影响和干扰GPER蛋白表达对胰岛素促子宫内膜癌细胞增殖能力的影响。方法:Western-blotting和SRB法检测不同浓度胰岛素对子宫内膜癌细胞系Hec-1a和Ishikawa细胞增殖能力的影响;rt-PCR法筛选胰岛素对子宫内膜癌细胞发挥作用的受体;Western-blotting和免疫荧光共聚焦试验检测胰岛素对子宫内膜癌细胞中GPER表达的影响;应用干扰GPER表达的si RNA转染Hec-1a和Ishikawa细胞,仅加入转染试剂的细胞作为阴性对照;Western-blotting检测转染效率及干扰GPER表达对下游信号通路的影响;SRB法检测细胞增殖能力改变。结果:胰岛素通过调控AKT/PI3K通路磷酸化水平促进子宫内膜癌细胞Hec-1a和Ishikawa的增殖;胰岛素通过上调GPER的表达增加子宫内膜癌细胞对雌激素的敏感性;GPER参与调控胰岛素促进子宫内膜癌细胞增殖过程。结论:胰岛素可以通过上调GPER的表达增加子宫内膜癌细胞对雌激素的敏感性,从而调控AKT/PI3K通路磷酸化水平,促进子宫内膜癌细胞增殖,提示胰岛素对子宫内膜癌的发生和发展存在促进作用。目的:探讨子宫内膜癌细胞系Hec-1a和Ishikawa中胰岛素对TET1的表达水平的影响和调控TET1蛋白表达对胰岛素促子宫内膜癌细胞增殖能力的影响。方法:Western-blotting和免疫荧光共聚焦试验检测胰岛素对子宫内膜癌细胞中TET1表达的影响;应用干扰TET1表达的si RNA转染Hec-1a和Ishikawa细胞,仅加入转染试剂的细胞作为阴性对照;Western-blotting检测转染效率及干扰TET1表达对下游信号通路的影响;SRB法检测细胞增殖能力改变。结果:胰岛素可以通过上调TET1的表达调控AKT/PI3K通路磷酸化水平,促进子宫内膜癌细胞增殖。结论:胰岛素通过上调TET1的表达调控子宫内膜癌细胞增殖,提示胰岛素对子宫内膜癌的发生和发展具有促进作用。目的:探讨不同类型子宫内膜病变中TET1(Ten-Eleven Translocation 1)的表达水平和干扰TET1蛋白表达对子宫内膜癌细胞系Hec-1a和Ishikawa细胞生物学行为的影响。方法:免疫组化检测组织中TET1的表达;应用干扰TET1表达的si RNA转染Hec-1a和Ishikawa细胞,仅加入转染试剂的细胞作为阴性对照;Western-blotting检测转染效率;SRB法检测细胞增殖能力改变;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力改变;划痕试验检测细胞迁移能力改变;流式细胞学方法检测细胞周期改变。结果:子宫内膜组织中TET1的表达随病理类型进展而升高;干扰组TET1蛋白表达水平明显低于对照组;干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭能力均受到不同程度抑制,同时出现G1/S期细胞周期阻滞。结论:子宫内膜癌及子宫内膜增生性病变组织中TET1表达水平明显高于正常对照组织;干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力下降,且出现G1/S期细胞周期阻滞,提示TET1在子宫内膜癌的增殖和转移过程中发挥重要作用。目的:探讨胰岛素对子宫内膜癌细胞中GPER启动子区域羟甲基化水平的调控及TET1在其中发挥的作用。方法:组织芯片和免疫组化检测不同类型子宫内膜组织中GPER和TET1的表达及其相关性;Western-blotting,荧光素酶报告基因,Hme Dip检测TET1对GPER启动子区域活性的调控。结果:TET1与GPER在不同病理类型的子宫内膜组织中的表达呈正相关,TET1可以上调GPER启动子区域活性从而增加子宫内膜癌细胞中GPER的表达。结论:TET1在子宫内膜癌细胞中通过羟甲基化调控GPER的表达并影响子宫内膜癌细胞的增殖。
【关键词】：子宫内膜癌 胰岛素 GPER 子宫内膜癌 胰岛素 TET1 子宫内膜癌 TET1 增殖 子宫内膜癌 TET1 GPER
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 第一部分 胰岛素通过增加 GPER（G protein-coupled estrogen receptor）表达促进子宫内膜癌细胞增殖8-33
• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 1. 引言11-12
• 2. 材料与方法12-26
• 2.1 材料12-17
• 2.1.1 主要试剂、耗材及仪器12-17
• 2.1.2 细胞系17
• 2.2 方法17-26
• 2.2.1 细胞培养17
• 2.2.2 转染17-18
• 2.2.3 Western Blotting18-21
• 2.2.4 SRB21-22
• 2.2.5 免疫荧光共聚焦试验22-23
• 2.2.6 实时荧光定量PCR技术23-26
• 3. 结果26-32
• 3.1 胰岛素通过调控AKT/PI3K通路磷酸化水平促进子宫内膜癌细胞增殖26-28
• 3.2 胰岛素增加子宫内膜癌细胞对雌激素的敏感性28-30
• 3.3 胰岛素在子宫内膜癌细胞系中上调GPER的表达30-31
• 3.4 GPER参与胰岛素促进子宫内膜癌细胞增殖过程31-32
• 4. 讨论32-33
• 第二部分 胰岛素通过增加 TET1（Ten Eleven translocation 1）表达促进子宫内膜癌细胞增殖33-47
• 摘要33-34
• Abstract34-35
• 1. 引言35-36
• 2. 材料与方法36-43
• 2.1 材料36-40
• 2.1.1 主要试剂、耗材及仪器36-40
• 2.1.2 细胞系40
• 2.2 方法40-43
• 2.2.1 细胞培养40
• 2.2.2 提取基因组DNA40-41
• 2.2.3 点杂交41
• 2.2.4 目的质粒扩增及提取41-43
• 3. 结果43-46
• 3.1 胰岛素上调子宫内膜癌细胞中TET1的表达和 544-45
• 3.2 TET1参与胰岛素促进子宫内膜癌细胞增殖过程45-46
• 4. 讨论46-47
• 第三部分 TET1 在子宫内膜病变中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖和迁移能力的影响47-64
• 摘要47-48
• Abstract48-49
• 1. 引言49-50
• 2. 材料与方法50-57
• 2.1 材料50-54
• 2.1.1 主要试剂、耗材及仪器50-53
• 2.1.2 细胞系53
• 2.1.3 标本收集53-54
• 2.2 方法54-57
• 2.2.1 细胞培养54
• 2.2.2 划痕试验54
• 2.2.3 Transwell试验54
• 2.2.4 免疫组化54-56
• 2.2.5 细胞周期检测56
• 2.2.6 统计学分析56-57
• 3. 结果57-61
• 3.1 子宫内膜增生性病变和子宫内膜癌中TET1的表达随病变进展而升高57-58
• 3.2 干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞的增殖能力下降58-59
• 3.3 干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞的迁移能力下降59-60
• 3.4 干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞的侵袭能力下降60
• 3.5 干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞的细胞周期变化60-61
• 4. 讨论61-64
• 第四部分 胰岛素通过上调 TET1 促进 GPER 启动子区域羟甲基化增加GPER 表达64-79
• 摘要64-65
• Abstract65-66
• 1. 引言66
• 2. 材料与方法66-75
• 2.1 材料66-71
• 2.1.1 主要试剂、耗材及仪器66-71
• 2.1.2 细胞系71
• 2.2 方法71-75
• 2.2.1 细胞培养71
• 2.2.2 Hme Dip71-73
• 2.2.3 荧光素酶报告基因73-74
• 2.2.4 组织芯片TMA的制备74-75
• 3 结果75-78
• 3.1 在不同病理类型的子宫内膜组织中GPER和TET1呈正相关性表达75-77
• 3.2 TET1与GPER的关系及两者对子宫内膜癌细胞增殖的影响77-78
• 4 讨论78-79
• 参考文献79-83
• 致谢83-84
• 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文84

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