KLF2调控S1PR1对类中性粒细胞迁移的影响

发布时间：2017-11-09 18:25

  本文关键词：KLF2调控S1PR1对类中性粒细胞迁移的影响

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【摘要】：目的和意义：支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病，约50%的哮喘与嗜酸性粒细胞炎症有关，而其余的哮喘中大部分伴随着中性粒细胞增多。在重症哮喘患者的诱导痰中，中性粒细胞比例明显增加。哮喘中性粒细胞增多与中性粒细胞凋亡延迟或减少有关，也与中性粒细胞表面粘附迁移分子表达增加，引起迁移增加有关。本文从细胞水平研究KLF2是否调控S1PR1，影响类中性粒细胞迁移。 方法： （1）将HL-60细胞用含1.3%DMSO培养5天后，，分化为类中性粒细胞，通过迪夫快速染色法观察细胞核形态及Realtime PCR检测中性粒细胞分化标志物CD11b mRNA的表达，确定是否诱导成功。 （2）用空载及KLF2-RNAi慢病毒载体感染类中性粒细胞。应用荧光显微镜鉴定感染率。应用Western blot、Realtime PCR进行KLF2敲减率鉴定。 （3）Realtime PCR检测三组(空白组、空载组、干扰组)中KLF2、S1PR1mRNA的表达，Western blot检测三组中KLF2、S1PR1蛋白的表达，免疫荧光检测KLF2蛋白表达。 （4）应用Transwell实验计数0.1μM S1P对三组类中性粒细胞的趋化迁移率。 结果： 1.成功的将HL-60细胞诱导成类中性粒细胞 将HL-60细胞用含1.3%DMSO培养5天后提取细胞，经迪夫快速染色法发 现细胞体积变小，出现肾型核。Real-timePCR检测CD11b mRNA表达情况， 类中性粒细胞CD11b表达明显增加（P＜0.01）。 2.慢病毒转染①荧光显微镜下观察干扰组和空载组的感染效率，感染效率达到90%以上。②KLF2表达情况Real-timePCR结果中，干扰组较空白组、空载组KLF2表达明显减少（P＜0.01），空载组和空白组KLF2表达基本相同（P＞0.05），计算其敲除率约为81%。慢病毒成功干扰KLF2基因表达，且排除病毒本身的干扰。免疫荧光显示，干扰组较空白组、空载组KLF2表达减少。 3.S1PR1mRNA表达变化 Realtime PCR结果中，干扰组较空白组、空载组S1PR1表达明显减少（P＜0.01）， 4.S1PR1蛋白表达变化 Western blot结果中，干扰组较空白组、空载组S1PR1表达明显减少（P＜0.01）。 5.Transwell实验： 选取0.1μM浓度的S1P进行Transwell实验，干扰组较空白组、空载组，迁移率明显减少（P＜0.01）。 结论： KLF2通过上调S1PR1表达，促进S1P趋化下的类中性粒细胞迁移。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R562.25

【参考文献】

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1 王梅芳;戴爱国;胡瑞成;高军丽;朱黎明;;转录因子Nrf2/Bach1及MAPK激酶调控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用[J];中国病理生理杂志;2009年05期

本文编号：1163076