ESAT6、CFP10和HspX三种抗原联合在活动性和潜伏性结核人群鉴别诊断中的应用研究

发布时间：2018-04-01 13:17

  本文选题：结核分枝杆菌　切入点：ESAT6　出处：《兰州大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：现有的实验方法不能够准确地鉴别活动性和潜伏性结核人群,为了寻找更加有效的诊断策略来辅助结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test, TST)或者取代它,从而鉴别活动性和潜伏性结核,我们选择了结核分枝杆菌RD1区编码的蛋白ESAT6和CFP10以及在其缺氧的条件下产生的HspX,试图将ESAT6、 CFP10和HspX三个抗原联合诊断运用于鉴别活动性和潜伏性结核中。 方法：收集临床上肺结核患者(28例)、患者的密切接触者(14例)以及健康体检大学生(11例)的外周血,共分四组：肺结核患者分为肺结核初治组(Initial treated-tuberculosis, IT-TB)、肺结核复治组(Retreated-tubercu-losis, RT-TB),密切接触组(Close contacts, CC,接触至少一年以上)和健康组(Healthy donors, HD)。ELISPOT技术检测不同人群在ESAT6、CFP1O和HspX分别刺激后分泌IFN-γ的T淋巴细胞数。ELISA技术检测血浆中的总IFN-γ浓度以及ESAT6、CFP10和HspX特异性IgG水平。 结果：ESAT6、CFP10和IHspX体外分别刺激实验对象的外周血淋巴细胞,可使其分泌大量IFN-γ。与HD组和CC组相比,结核病患者的两组中,ESAT6和CFP10蛋白刺激的分泌IFN-γ的细胞数要明显更多(p＜0.05)。而结核特异性抗原HspX刺激后的结果显示,在HD组和CC组中,每3×105PBMCs中形成的斑点单位和结核病患者类似甚至多于结核病患者(p＞0.05) ESAT6、CFP10和IHspX分别包被96孔板用来检测四组人群血浆中的特异性IgG水平。在ESAT6包被的多个稀释度中,除了1：100稀释度外,CC组与IT-TB组或是RT-TB组相比OD值要低,结果有明显的统计学差异(p＜0.05)。在CFP10包被的实验里,四组的特异性IgG水平没有明显的不同。在HspX包被的实验里,CC组中吸光度值是高于其他组。在1：100的稀释度时,CC组的IgG水平明显高于HD组,IT-TB和RT-TB组。(p＜0.01)在1：800、1：1600、1：6400和1：12800四种稀释度中,CC与RT-TB相比结果有统计学差异。(p＜0.05) ELISA检测血浆中总的IFN-γ水平,HD组比RT-TB组分泌更高水平的IFN-γ且差异具有统计学意义。(p＜0.05) 结论：各人群对ESAT6、CFPIO和HspX三种抗原表现出明显差异。在ELISPOT实验ESAT6和CFP10蛋白刺激组的结果,分泌IFN-γ的细胞数表现出比正常人高而HspX蛋白刺激的结果比正常人低。在ELISA实验ESAT6和CFP10蛋白组中,特异性IgG水平表现出比结核病患者低而HspX的结果比结核病患者高。因此,利用ELISPOT以及ELISA技术,使用这三种抗原联合可以对活动性和潜伏性结核进行初步筛选,可作为结核病患者有效的鉴别诊断策略候选。
[Abstract]:Objective: the existing experimental methods can not accurately distinguish active and latent tuberculosis population, in order to find a more effective diagnostic strategy to assist tuberculin skin test (TST) or replace it. To identify active and latent tuberculosis, We selected the protein ESAT6 and CFP10 encoded in the RD1 region of Mycobacterium tuberculosis and the HspX produced under hypoxia condition. We tried to use ESAT6, CFP10 and HspX in the combined diagnosis of active and latent tuberculosis. Methods: the peripheral blood of 28 patients with pulmonary tuberculosis, 14 patients with close contact with the patients and 11 healthy college students were collected. Pulmonary tuberculosis patients were divided into four groups: initial treated-tuberculosis (IT-TBX) group, retreated-tubercu-losism (RT-TBN) group, close contact group (CCL, exposed to at least one year) and healthy group. HD).ELISPOT technique was used to detect CFP1O and HspX stimulation in different groups. The total concentration of IFN- 纬 and the levels of CFP10 and HspX specific IgG in plasma were measured by Elisa and the number of T lymphocytes secreting IFN- 纬. Results the peripheral blood lymphocytes of the subjects were stimulated by CFP10 and IHspX in vitro, which could secrete a great deal of IFN- 纬, compared with those in HD and CC groups, and compared with those in HD and CC groups. The number of IFN- 纬 secreted by ESAT6 and CFP10 protein in the two groups was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). However, the results of HspX stimulation with TB specific antigen showed that, in HD and CC groups, the number of IFN- 纬 secreted by ESAT6 and CFP10 protein was significantly higher than that in CC group. The number of spots per 3 脳 105PBMCs is similar to that of TB patients, even more than that of TB patients (p > 0.05). ESAT6 CFP10 and IHspX were coated with 96 hole plates to detect the specific IgG level in plasma of the four groups. The OD value of CC group was lower than that of IT-TB group or RT-TB group except for 1: 100 dilution. Results there was significant statistical difference (P < 0.05). In the CFP10 coated experiment, There was no significant difference in the specific IgG levels among the four groups. In the HspX coated experiment, the absorbance value of the CC group was higher than that of the other groups. At the dilution of 1: 100, the IgG level of the CC group was significantly higher than that of the HD group (IT-TB) and the RT-TB group (< 0.01) at 1: 800, 1: 16001: 6400 and 1: 12800. There was statistical difference between CC and RT-TB. (P < 0.05). Total level of IFN- 纬 in plasma detected by ELISA the level of IFN- 纬 in HD group was higher than that in RT-TB group and the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion: the three antigens of ESAT6CF-PIO and HspX were significantly different among different population groups, and the results of ESAT6 and CFP10 protein stimulation in ELISPOT test were significant. The number of IFN- 纬 secreting cells was higher than that of normal persons and the stimulation of HspX protein was lower than that of normal controls. In the ELISA test ESAT6 and CFP10 protein groups, the specific IgG level was lower than that in TB patients and the HspX level was higher than that in TB patients. Using ELISPOT and ELISA, the combination of these three antigens can be used to screen active and latent tuberculosis, and can be used as an effective strategy candidate for differential diagnosis of TB patients.
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R521

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