EETs对博来霉素致小鼠肺纤维化的影响

发布时间：2018-05-25 08:07

  本文选题：肺纤维化 + 环氧-二十碳三烯酸　； 参考：《中南大学》2012年硕士论文

【摘要】：肺纤维化(pulmonary fibrosis, PF)是由多种原因引起的慢性肺部疾病,其病理过程表现为肺组织损伤修复失调、细胞外基质重构、胶原过度沉积,进而导致肺泡结构破坏,最终发生肺纤维化。目前肺纤维的发病机制尚未完全阐明,疗效不佳。当细胞受到多种因素刺激时,大量的花生四烯酸(arachidonic acid, AA)从细胞膜中分解释放,并在细胞色素P450环氧化物酶(cytochrome P450, CYP)的作用下生成环氧-二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids, EETs), EETs具有抗炎、舒张血管平滑肌、降低血压、减轻心肌和大脑的缺血再灌注损伤以及抗凋亡等作用,但EETs能被可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase, sEH)转化为生物活性甚微的二羟基二十碳三烯酸(dihydroxyeicosatrienoic acids, DHET)。EETs对肺纤维化有无影响目前尚未见报道。本实验采用特异性sEH抑制剂TPPU抑制该酶的活性以增加胞内EETs的含量,分别在整体水平和细胞水平探讨EETs对肺纤维化的影响。 目的：观察EETs对BLM致小鼠肺纤维化的影响以及对小鼠成纤维细胞增殖、分化和胶原合成的影响。 方法：(1)实验分为三组：正常组、BLM组、BLM+TPPU组,气管注射BLM (10mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型,通过灌胃给予小鼠TPPU(1mg/day/kg)以增加肺内EETs的含量。采用HE和Masson染色观察肺组织的形态学变化；Real-time PCR检测小鼠肺组织胶原的表达； (2)采用MTT法观察EETs对小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)增殖活性的影响；流式细胞术检测EETs对小鼠成纤维细胞的细胞周期的影响；RT-PCR观察EETs对TGF-β1诱导的小鼠成纤维细胞的α-SMA、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。 结果： 1.动物实验 (1)小鼠肺组织形态学改变：HE染色显示BLM组第21天肺纤维化病灶形成,TPPU+BLM组肺纤维化较BLM组显著改善；Masson染色显示BLM组第21天胶原大量沉积,TPPU+BLM组较BLM组显著改善(P0.05)； (2) RT-PCR检测显示：与正常组相比,BLM组Ⅰ型胶原mRNA的表达显著升高(P0.05)；与BLM组相比,TPPU+BLM组Ⅰ型胶原mRNA的表达显著降低(P0.05)。 2.细胞实验 (1)MTT法结果显示：TPPU处理后呈时间依赖性抑制成纤维细胞的增殖(P0.01)；并呈剂量相关性(0.1μM,1μM,10μM)抑制成纤维细胞的增殖(P0.05)； (2)流式细胞术结果显示：与正常组(17.24±2.12)相比,TGF-β1组(24.5±1.05)%成纤维细胞S期比例显著增加(P0.05)；与DMSO+TGF-β1组(25.55±2.6)%相比,TPPU(1μM)+TGF-β1组(20.37±2.6)%和TPPU(10μM)+TGF-β1组(19.36±0.13)%成纤维细胞S期比例均显著降低(P0.05)； (3)RT-PCR检测结果显示：与正常组相比,TGF-β1(?)应激后成纤维细胞α-SMA mRNA的表达显著升高(P0.05)；TPPU预处理组成纤维细胞α-SMA mRNA的表达显著降低(P0.05)； (4)RT-PCR检测结果显示：与正常组相比,TGF-β1应激成纤维细胞后可引起Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达显著增加(P0.05),TPPU预处理组可显著降低成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达(P0.05)。 结论： 1.EETs可抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化； 2.EETS可抑制成纤维细胞的增殖、分化及胶原合成。
[Abstract]:Pulmonary fibrosis ( PF ) is a chronic pulmonary disease caused by a variety of reasons . Its pathological process is lung tissue damage repair disorder , extracellular matrix remodeling , collagen overdeposition , which leads to destruction of alveolar structure and eventual pulmonary fibrosis . The effect of EETs on pulmonary fibrosis was not reported . The effect of EETs on pulmonary fibrosis was investigated by using specific sEH inhibitor TPPU to inhibit the activity of the enzyme to increase intracellular EETs .

Objective : To observe the effect of EETs on pulmonary fibrosis in mice and the effect of EETs on proliferation , differentiation and collagen synthesis of mouse fibroblast .

Methods : ( 1 ) The experiment was divided into three groups : normal group , blm group , blm + tppu group , intratracheal injection of blm ( 10 mg / kg ) to replicate lung fibrosis model of mice , and mice were given tppu ( 1 mg / day / kg ) by gavage to increase the content of eets in the lungs .
Real - time PCR was used to detect the expression of collagen in lung tissue of mice .


( 2 ) MTT assay was used to observe the effect of EETs on proliferation activity of mouse fibroblast ( NIH 3T3 cell line ) .
Effect of EETs on cell cycle of mouse fibroblasts by flow cytometry
The effects of EETs on the expression of 伪 - SMA , type鈪燾ollagen and type 鈪，

本文编号：1932714