基于MAPK和NF-κB信号通路的姬松茸多糖抑制哮喘气道炎症的实验研究

发布时间：2017-03-21 10:02

  本文关键词：基于MAPK和NF-κB信号通路的姬松茸多糖抑制哮喘气道炎症的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过OVA诱导建立支气管哮喘小鼠模型,并给予姬松茸多糖进行治疗,研究姬松茸多糖对支气管哮喘气道炎症的影响及其可能的作用机制。方法取正常雌性BALB/c小鼠40只,体重18±5g,随机分为5组,每组8只,正常对照组、哮喘模型组、姬松茸多糖低剂量治疗组、姬松茸多糖高剂量治疗组、地塞米松阳性对照组。除正常对照组外,其余3组于第1天、第14天分2次腹腔注射抗原液1ml(含卵蛋白100mg,氢氧化铝干粉100mg)致敏,正常对照组用等量的生理盐水进行致敏。第22天开始将小鼠放入自制的不完全封闭的箱内,给予1%卵蛋白(OVA)溶液用雾化器吸入激发,每天1次,每次20分钟,连续4天。正常对照组用等量的生理盐水进行激发。每次雾化吸入激发前1小时给予姬松茸多糖干预,姬松茸多糖低剂量组给予200 mg/Kg灌胃、姬松茸多糖高剂量组给予400mg/Kg灌胃,正常对照组和哮喘模型组灌胃等量的生理盐水,每天1次,共10天。第25天,末次激发结束后24小时内,各组小鼠均以乙醚麻醉后,按要求取标本。采末次致敏加强24h乙醚麻醉后处死小鼠,剪开颈部皮肤,并于气管正中处剪一小口,插入气管套管。以磷酸盐缓冲液4mL行支气管肺泡灌洗,来回冲洗3次,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本等。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13含量,用Diff-Quick染色观察BALF中炎症细胞分类和数目变化。通过HE染色法、PAS染色法观察小鼠肺组织炎性细胞浸润等病理变化；免疫组织化学染色法观察小鼠肺组织内NF-κB p65蛋白的表达情况；免疫印迹法检测各组小鼠肺组织内p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的蛋白表达情况。结果 (1)与正常对照组相比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数较明显升高,差异显著(P0.05)；姬松茸多糖低、高剂量组小鼠BALF中炎症细胞总数和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数较哮喘模型组明显降低,差异显著(P0.05),与正常组比较,哮喘模型组小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平升高,差异显著(P0.05)；姬松茸多糖低、高剂量组小鼠BALF中细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平降低,与哮喘模型组比较,差异显著(P0.05)(2)通过观察肺组织HE、PAS染色可见,哮喘模型组小鼠支气管痉挛,管腔狭窄,上皮细胞肿胀、脱落,支气管及血管周围有大量炎症浸润,以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞为主,黏膜及黏膜下层水肿明显。姬松茸多糖低、高剂量组小鼠肺组织病理学改变较哮喘模型组显著减轻。正常组小鼠肺组织无明显病理改变。姬松茸多糖低、高剂量组之间比较,无显著差异(P0.05)。(3)通过观察免疫组化染色：NF-κBp65的阳性表达在哮喘模型组中水平明显增高；而在姬松茸多糖提取物的两组阳性蛋白表达水平明显降低。(4)免疫印迹法检测结果显示：p-ERK、p-p38MAPK、p-JNK的表达在哮喘模型组明显高于对照组(P0.05)；而在姬松茸多糖两组的表达明显低于哮喘模型组(P0.05)。结论：姬松茸多糖可能通过抑制哮喘小鼠肺组织内p-p38MAPK、p-ERK、p-JNK及NF-κBp65蛋白的表达,下调Th2类炎症细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平,有效抑制哮喘小鼠气道炎症细胞浸润,从而减轻气道炎症反应。
【关键词】：支气管哮喘 姬松茸多糖 MAPK NF-κB 炎性细胞因子
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 中英文缩略词10-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料与方法16-32
• 2.1 实验材料16-18
• 2.1.1 实验动物16
• 2.1.2 药物16
• 2.1.3 主要试剂16-17
• 2.1.4 主要仪器17-18
• 2.1.5 器械与其他用品18
• 2.2 实验方法18-30
• 2.2.1 分组18
• 2.2.2 动物模型建立18-19
• 2.2.3 取材方法19
• 2.2.4 BALF中的各炎症细胞分类及计数19-20
• 2.2.5 BALF中IL-4、IL-5、IL-13的含量检测20-24
• 2.2.6 肺组织病理学检查24-26
• 2.2.7 免疫组织化学染色法检测NF-κB p65的表达26-27
• 2.2.8 肺组织内p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的表达检测27-30
• 2.3 统计学处理30-32
• 第三章 结果32-39
• 3.1 各实验组小鼠BALF中的炎症细胞分类及计数32
• 3.2 各实验组小鼠BALF中炎性细胞的变化32
• 3.3 各实验组小鼠BALF中炎症细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的含量变化32-34
• 3.4 组织染色34-36
• 3.4.1 HE染色34-35
• 3.4.2 PAS染色35-36
• 3.4.3 NF-κB p65免疫组织化学染色36
• 3.5 Western blotting检测各组小鼠肺组织中p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK的表达情况36-39
• 3.5.1 p-ERK的表达36-37
• 3.5.2 p-JNK的表达37-38
• 3.5.3 P-P38MAPK 的表达38-39
• 第四章 讨论39-44
• 第五章 结论44-45
• 参考文献45-49
• 致谢49-50
• 综述50-56
• 参考文献54-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 时国朝;万欢英;;支气管哮喘的免疫发病机制——从Th1/Th2细胞失衡到Th2/Treg细胞失衡[J];内科理论与实践;2011年02期

2 杨牧祥;于文涛;徐华洲;王晓红;;咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5mRNA表达的影响[J];中国中医药信息杂志;2008年09期

3 孟俊龙;冯翠萍;程红艳;常明昌;王将;李海杰;;姬松茸多糖对大鼠脾脏细胞因子mRNA表达的影响[J];中国食品学报;2012年04期

4 邹晓丽;李在军;李天贺;刘洋;;姬松茸配伍1,6-二磷酸果糖抗疲劳研究[J];中国老年学杂志;2013年08期

5 陈岚兰;;支气管哮喘与咳嗽变异性哮喘气道嗜酸性粒细胞差异的研究[J];中国民康医学;2013年14期

6 张杰;杨旭东;申梅淑;宋高臣;王桂云;石杰;田丽梅;杨骄霞;詹必勋;;羊栖菜联合姬松茸多糖对胰岛β细胞保护作用[J];中国食用菌;2014年05期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张爱芝;ERK活性对哮喘大鼠CyclinD1表达的影响及调控作用[D];山西医科大学;2010年

  本文关键词：基于MAPK和NF-κB信号通路的姬松茸多糖抑制哮喘气道炎症的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：259429