血管内皮生长因子在急性肺损伤中动态变化以及激素干预效果的研究

发布时间：2020-03-30 02:25

【摘要】：目的:探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)在急性肺损伤中(Acute lung injury, ALI)的动态变化和地塞米松的干预效果,为临床合理应用糖皮质激素治疗不同诱因引起的ALI/ARDS提供理论依据。 方法:将112只清洁雄性SD大鼠按随机数字表法分为14组,尾静脉注射生理盐水1ml对照组、尾静脉注射脂多糖(LPS 8mg/kg)2h、4h、6h模型组、气管内滴入大肠杆菌标准菌株悬液(E.coli 3ml/kg)12h、24h、36h模型组,NS+Dex组及LPS 2h+Dex组、4h+Dex组、6h+Dex组、E.coli12h+Dex组、24h+Dex组、36h+Dex干预组,每组8只。干预组在造模结束后立即腹腔内注射地塞米松2mg/kg。造模结束后于各时间点10%水合氯醛腹腔注射麻醉(3ml/kg),固定在手术台上。股动脉放血,收集血液,离心(3000 rpm,4℃,10min),吸取上清,分装,-80℃保存,用于进行VEGF测定,开胸处死动物,暴露肺组织,止血钳夹闭右主支气管后,将右肺完整切除,取右肺上叶肺组织用于湿/干重比检测,取右肺中叶肺组织用10%中性福尔马林溶液固定,留做病理及免疫组织化学检查。分离出气管,经气管插管行左肺支气管肺泡灌洗,取支气管肺泡灌洗液(BALF),离心(1200 rpm,4℃,10min),上清液分装,-80℃保存,用于蛋白含量及VEGF的测定。细胞沉淀悬浮于200微升生理盐水中,进行白细胞计数,同时观察地塞米松对上述指标的影响。 结果:(1)肺组织病理形态学:光镜下观察脂多糖2小时后开始出现肺血管充血,炎症细胞的浸润,肺间质水肿,4小时出现典型ALI的表现:透明膜形成,6小时与4小时病理半定量评分比较无统计学差异;在气管内滴入大肠杆菌12小时后,发现大量炎症细胞浸润、气道上皮细胞的脱落,肺泡水肿,24小时出现肺泡上皮细胞空泡化,坏死,细胞增殖,大量纤维蛋白的渗出,透明膜形成,部分肺实变。36小时较24小时病理半定量评分无统计学差异。给予激素干预后,LPS模型在2小时、4小时、6小时可见浸润的炎症细胞减少,蛋白渗出较少,病理半定量评分也相应减少;E.coli模型在24小时、36小时出现肺泡水肿减轻,炎症细胞浸润及透明膜减少,病理半定量评分也相应减少。 (2)BALF中细胞总数、蛋白含量和肺组织W/D的变化:在LPS模型中BALF中细胞计数随着时间的延长,肺泡灌洗液中细胞计数明显增多,给予激素后肺泡灌洗液中细胞计数明显下降;肺泡灌洗液中蛋白4小时达高峰,6小时开始下降,激素干预组同比相应下降;湿干比,在LPS组2小时较对照组明显升高,但随着时间的推移,未出现统计学意义的进一步增加,激素干预组同比相应下降;在E.coli模型中肺泡灌洗液中细胞计数,肺泡灌洗液中蛋白,湿干比,随着时间的延长,未出现统计学意义的增加,12小时、24小时与36小时比较无统计学意义,给予激素后24小时、36小时均明显下降。 (3)血清和BALF中VEGF含量的变化:血清中VEGF在LPS模型中2小时明显高于对照组,6小时达高峰;在E.coli模型中12小时明显高于对照组,随着时间延长而增多,但无统计学意义,激素干预在两模型组血清VEGF未呈现显著差异,BALF中VEGF在LPS模型中2小时明显高于对照组,随着时间延长逐渐增加;在E.coli模型中12小时明显高于对照组,随着时间延长,逐渐增多;激素干预后两模型BALF中VEGF均下降。 (4)VEGF在肺组织表达的变化:VEGF阳性细胞百分比在LPS模型中2小时明显低于对照组,4小时出现升高,并高于对照组,6小时明显高于4小时,激素干预组各时间点均下降;在E.coli模型12小时明显高于对照组,随着时间延长表达增多,给予激素后下降;阳性目标积分光密度值在LPS模型中2小时明显低于对照组,随着时间延长增多,但6小时才达对照水平,给予激素后明显下降,在E.coli模型12小时明显高于对照组,随着时间延长表达增多,给予激素后下降。 (5)直线相关分析显示: E.coli组VEGF阳性率与肺泡灌洗液中细胞计数、阳性目标积分光密度值呈显著正相关与血清中VEGF呈负相关;LPS组BALF中VEGF与肺泡灌洗液中细胞计数、病理评分、BALF中VEGF阳性率、阳性目标积分光密度值呈显著正相关与血清中VEGF呈负相关。 结论: 1成功的复制了气道内注入大肠杆菌混悬液导致的内源性急性肺损伤模型和尾静脉注射LPS导致的外源性急性肺损伤模型。 2 LS诱导急性肺损伤早期肺组织VEGF表达下降,随着时间的延长表达升高,血清和肺泡灌洗液中VEGF表达升高;E.coli诱导急性肺损伤肺组织和肺泡灌洗液中VEGF随着时间延长表达升高。 3地塞米松能够降低肺组织和肺泡灌洗液中VEGF的表达,在早期减轻肺水肿,在晚期抑制上皮细胞的产生。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R563.8

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