DEHP的遗传毒性和诱导哮喘发病机理的初步研究

发布时间：2020-05-13 06:38

【摘要】： 进入21世纪以来,伴随着我国塑料工业的高速发展,增塑剂邻苯二甲酸酯工业也在快速发展着,目前中国的年产量已经超过日本,仅次于美国,名列世界第二位。更为重要的是我国邻苯二甲酸酯消费量已经超过美国,成为全球第一消费大国,我国居民体内邻苯二甲酸酯类化合物的负荷量正在快速增长。大量研究结果表明,邻苯二甲酸酯类化合物可通过多种途径进入生物体内产生毒性作用。邻苯二甲酸二乙基已酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP),是目前使用最为广泛的一种邻苯二甲酸酯类,在塑料工业中是最主要的增塑剂。关于DEHP毒性的研究是目前国际上环境医学领域的热点和难题。本课题主要探讨DEHP在诱发哮喘和哮喘发病机理方面的作用及遗传毒性,这对全面和系统的了解DEHP毒性具有十分重要的意义。本研究以Wistar大鼠为研究对象,通过DEHP灌胃染毒建立DEHP诱导型大鼠哮喘模型检测大鼠肺功能、嗜酸粒细胞数目和肺组织切片来探讨DEHP诱发哮喘的发病机理同时用SDS-KCI实验检测DEHP对大鼠肝细胞的遗传毒性。研究结果如下: 1.DEHP致DNA-蛋白质交联效应在正常细胞中存在着一定量的DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslinks,DPC)。这是DNA与核蛋白的正常联系或其代谢的结果,对维持细胞的正常活动具有重要作用,当有外来物理、化学因素作用时,则可诱导出过量的DPC。DPC与其他DNA损伤相比,较难修复,且DPC仅可发生在单链DNA上,这表明这种交联只能发生在DNA复制和转录期间,因此DPC的形成,必将对DNA的构象和功能(复制与转录)产生严重的影响,并在其复制过程中容易造成某些重要基因(如抑癌基因)的丢失,导致肿瘤或某些严重疾病的发生。可见DPC过度增加是一种病理现象,是DNA分子的一种严重的遗传损伤。本研究以大鼠肝细胞为材料,采用SDS-KCI沉淀法对DEHP致DPC效应进行了研究。本研究证实了较高浓度的DEHP(70 mg·kg~(-1)·d~(-1))可诱导大鼠肝细胞产生DPC。 2.DEHP诱导大鼠哮喘的可能机理哮喘是一种常见的慢性呼吸道疾病。WHO把哮喘定为终身性疾病,哮喘给世界各国带来巨大的经济负担。近40年来,哮喘的发病率和死亡率在世界各地持续增长,而空气污染物被怀疑是主要原因,但其诱发过敏性哮喘的分子机理不清楚,揭示哮喘的分子机理不但有重要理论意义,也有重要的社会意义。流行病学研究表明DEHP可诱发人类的过敏症状甚而哮喘,然而Butala等的动物实验表明DEHP本身并不是过敏原,经DEHP暴露的小鼠体内并没有检测到DEHP特异性IgE。这提示我们DEHP可能通过其他的途径诱导哮喘的发生,根据本课题组的理论研究和实验研究,我们提出了“过敏体质激发原”和“获得性过敏体质”假说,我们假设以DEHP为代表的邻苯二甲酸酯在哮喘发生的过程中发挥的是“过敏体质激发原”作用,其可能使机体总IgE升高,即形成“获得性过敏体质”,在遇到较低水平的过敏原时即能诱发哮喘。本实验研究结果显示经DEHP灌胃染毒的大鼠本身并不能引发哮喘,只有在灌胃染毒的同时接触过敏原刺激(OVA致敏激发)才能诱发哮喘的发生。
【图文】：

诱导性,实验流程

sZOOS动物肺功能分析系统可用于测量动物肺功能的相关参数，容积件)、流速任)、气道阻力两、Re)、肺顺应性(Crs)、用力静呼气末功能残气量(FRC)等，，可为呼吸生理及药理研究提供。实验装置由动物呼吸机，信号调理器，体描箱和负压器组成，件，可对所检测指标进行实时监测，并进行数据的统计分析。它仪器冷冻离心机(Eppendorf-5415R);旋涡振荡仪;医用雾化器(鱼跃4针;各种型号注射器;吊针针头(内径=0.45~);三用电热恒实验仪器厂)，涡旋器，，F一4500型荧光分光光度计(日本日立)数器;酶标仪(Therm。公司产品);电子天平;)一80℃低温冰;计时器;倒置显微镜(LeicaDM4000B，Germany);切片机;方法HP诱导性哮喘大鼠模型的建立

示意图,雾化器,示意图

医用雾化器(超声波雾化器)内进行1%OVA溶液雾化吸入(如图4)，时间为 30min，雾化OVA气体温度控制在20一23℃。流量设置在中档，以使实验动物能有效吸入雾化气体，烟雾又不致影响体征观测为准。雾化时间选择在上午大鼠活跃期间。实验过程中，实验动物饲养在清洁、安静、温湿度稳定的环境中，每天喂食一次，给予充足饮水，并避免其接触其他有害致敏源，此为试验成功关键。图4采用医用雾化器进行1%OVA雾化激发示意图 2.1.2nEHP诱导性哮喘动物模型的制备 (0.7mg·kg一’·d一’oEHP+o认group和70mg·kg一，·d‘，nEHP+o认group)。本试验采用DEHp灌胃染毒(如图5所示)，即每天称取大鼠体重，再按其体重比例灌入相应剂量DEHP。DEHP与吐温一80按体积比1:1混合后，用蒸馏水稀释致所需浓度，染毒时间为3Od。实验进行第19d和
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R562.25

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