糖蛋白A主导重复序列在慢性阻塞性肺疾病急性加重期的表达研究

发布时间：2020-06-16 14:12

【摘要】：目的糖蛋白A主导重复序列(Glycoprotein A repetitions predominant,GARP)是近年来发现的表达于活化调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)上的特异性标记物。通过检测慢性阻塞性肺疾病急性加重期(Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease AECOPD)患者、肺功能正常吸烟者以及健康非吸烟者外周循环中调节性T细胞GARP表达的情况,评估Treg细胞的功能变化,探讨使用这一新的标记物是否会得出与以往研究不同的结论,分析GARP在COPD急性加重过程中的作用机制,探讨GARP的变化对效应T细胞活化的影响,为吸烟引起COPD急性加重的发生机制提供免疫方面的依据。方法选取住院AECOPD患者20例、体检肺功能正常的吸烟者20例以及健康非吸烟者20例,采用实时定量荧光PCR(Real Time PCR)技术检测外周血Foxp3和GARP mRNA的表达水平。流式细胞术(Flow Cytomertry,FCM)检测外周血调节性T细胞、活化调节性T细胞、效应T细胞(Teff)的表达水平。外周血细胞因子IL-10、TGF-β的表达水平用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。结果1.Real Time PCR结果显示:AECOPD组外周血Foxp3 mRNA水平明显高于健康非吸烟组,P0.05,有统计学差异。吸烟组外周血Foxp3 mRNA水平高于健康非吸烟组,低于AECOPD组,但无统计学差异,P0.05。AECOPD组外周血GARP mRNA水平明显高于吸烟组和健康非吸烟组,P0.05,有统计学差异,而吸烟组和健康非吸烟组之间无明显差异,P0.05。2.FCM结果显示:⑴效应T细胞的比例:无论是CD4~+CD69~+T效应细胞还是CD8~+CD69~+T效应细胞,在AECOPD组、吸烟组以及健康非吸烟组之间都没有明显的统计学差异,P0.05。CD4~+HLA-DR~+T和CD8~+HLA-DR~+T效应细胞的比例在健康非吸烟组、吸烟组和AECOPD组之间呈现逐渐升高的趋势,AECOPD组与健康非吸烟组、吸烟组相比显著升高,P0.05,差异有统计学意义,而吸烟组和健康非吸烟组相比无明显变化,P0.05。⑵Treg细胞的比例:CD4~+CD25~+CD127~(low)Foxp3~+T细胞的比例在健康非吸烟组、吸烟组和AECOPD组呈现逐渐升高的趋势,AECOPD组与其他两组比较明显升高,P0.05,差异有统计学意义,而吸烟组与健康非吸烟组相比无差异,P0.05。⑶活化Treg细胞的比例:CD4~+Foxp3~+GARP~+T细胞的比例在AECOPD组显著增高,与另两组比较,均有统计学差异,P0.05,而吸烟组与健康非吸烟组相比无差异,P0.05。3.ELISA结果显示:⑴IL-10的分泌水平:AECOPD组血清IL-10含量明显高于吸烟组和健康非吸烟组,P0.001。吸烟组和健康非吸烟组比较无明显差异,P0.05。⑵TGF-β的分泌水平:血清TGF-β含量在AECOPD组显著升高,与另两组比较均有明显差异,P0.001。吸烟组和健康非吸烟组相比无明显差异,P0.05。结论以GARP作为活化Treg的特异性标记物,与以往用Foxp3标记Treg细胞得到的结果一致,AE COPD患者体内调节性T细胞数量增多。但是GARP反应的是活化Treg的量,比Foxp3更能反应Treg细胞在COPD急性加重过程中的作用机制。在COPD急性加重过程中,炎症反应加剧,效应T细胞数量急剧升高,代偿性引起Treg细胞活化数量增多,抑制炎症反应,对COPD急性加重的预后产生有利的影响。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563.9
【图文】：

图 1. RNA 电泳图根据 RNA 电泳图可以判定从 PBMC 中提取的 RNA 是完整的。2.2 Real Time PCR 检测外周血 Foxp3 mRNA 的表达水平

RealTimePCR检测外周血Foxp3mRNA的扩增、溶解曲线

【参考文献】

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1 包鹤龄;方利文;王临虹;;1990-2014年中国40岁及以上人群慢性阻塞性肺疾病患病率Meta分析[J];中华流行病学杂志;2016年01期

2 邱洁;张雅囡;陈娟;罗涛;于献华;王继春;谭海;陆学兰;张锦;;宁夏回族自治区慢性阻塞性肺疾病流行病学调查分析[J];中华结核和呼吸杂志;2013年04期

本文编号：2716149