COPD大鼠气道成纤维细胞转染rHSG基因后观察细胞增殖、凋亡及与TGF-β1、PDGF表达水平关系

发布时间：2020-06-25 02:13

【摘要】：目的：本研究通过构建携带增殖抑制基因(rHSG)的真核表达载体,转染至慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道成纤维细胞,观察COPD大鼠气道成纤维细胞增殖、凋亡及转化生长因子(TGF-β1)、血小板衍生长因子(PDGF)表达水平关系,为干预气道成纤维细胞增殖引起肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病,打下基因治疗基础,并为寻找到延缓COPD病情进展提供了理论依据。 方法：采用SD雄性大鼠构建COPD大鼠模型,运用组织块贴壁法,体外培养COPD大鼠气道原代成纤维细胞,并用波形蛋白鉴定细胞,取3代细胞进行后续实验。通过分子克隆,构建携带rHSG基因的真核表达载体,实验分组为：对照组(COPD模型未转染组)、空载体pEGFP-nl组、转染pEGFP-rHSG组,实验将阳离子脂质体作为转染介质,把重组质粒转染到COPD模型大鼠气道成纤维细胞,分别感染24小时、48小时、3天、5天、7天后,使用MTT方法检测转染后成纤维细胞增殖凋亡情况；Western blot检测转染后rHSG、TGF-β1、PDGF蛋白含量；提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1、PDGF及rHSGmRNA的表达水平。对数据进行统计学分析,应用SPSS18.0软件,得到实验数据用x±s表示,采用单因素方差分析均数、标准差,P0.05为有显著性统计学意义。 结果：COPD大鼠气道成纤维细胞原代培养成功,经过免疫组化,波形蛋白鉴定呈阳性。随着rHSG基因转染大鼠气道成纤维细胞时间延长,rHSG基因转染组明显比模型对照组对成纤维细胞的增殖有抑制作用；TGF-β1、PDGF两个基因的mRNA表达量减少出现在转染24小时,其mRNA的表达量减少值达到了最大在7天的时侯,在5天-7天时候mRNA表达量也有减少,但是幅度较前减小各转染组间TGF-β1、PDGFmRNA表达量差别,满足P0.05。当pEGFP-rHSG转染到细胞24小时,rHSGmRNA表达量开始增加,增加值达到最大在7天的时侯,而转染5d-7d时表达仍有继续增加,但增加幅度较前面明显,各转染组间rHSG mRNA表达差别满足P0.05。 结论：rHSG基因与TGF-β1、PDGF基因的平衡关系被打破,是COPD气道重塑中至关因素。rHSG基因转染组随着感染时间延长明显够抑制COPD气道成纤维细胞增殖,相反COPD气道成纤维细胞中TGF-β1与PDGF随着rHSG基因感染时间延长出现低表达,证实当外源性rHSG基因转染到COPD大鼠气道成纤维细胞,能够调节TGF-β1、PDGF基因的过度表达,进而使气道成纤维细胞的增殖受到抑制。因此高效率的rHSG基因转染有可能会在一定程度上延缓COPD气道重塑进展。
【学位授予单位】：贵阳中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.9

【参考文献】

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本文编号：2728709