慢性哮喘小鼠气道血管生成的变化及其在气道重建中的意义

发布时间：2020-06-27 08:10

【摘要】：背景: 血管反应是炎症过程的中心环节。一些炎症反应特别是慢性炎症可刺激血管生成,新生成的血管又有助于组织的炎症反应,二者互为因果,形成恶性循环,使得局部炎症反应更为强烈和持久。哮喘的本质是气道慢性炎症性疾病,长期反复发作将导致气道结构的不可逆性改变,称为气道重建。研究证实,气道血管生成/血管重建也是哮喘的一个重要病理特征。目的: 通过观察慢性哮喘小鼠气道血管生成的变化,初步探讨其在气道重建中的意义,为哮喘气道血管生成的深入研究提供依据。方法: 1、慢性哮喘小鼠模型的建立通过多次抗原致敏和反复抗原滴鼻激发建立慢性哮喘小鼠模型。24只BALB/c小鼠随机分为3组,每组8只,即正常对照组、慢性哮喘组和地塞米松治疗组。哮喘组第0、7、14天给予0.01%OVA(每10ml含OVA 1mg、氢氧化铝8ml)200(l腹腔注射致敏,第21～30、48、62、74～76天0.2%OVA抗原液50(l滴鼻激发,共15次;对照组同时给予等体积NS腹腔注射和滴鼻。地塞米松治疗组每次激发前1h腹腔注射2mg/kg地塞米松;其余2组同时腹腔注射等体积NS。末次激发后24h眼球取血处死动物并留取血清,随即行右侧肺灌洗留取BALF,左肺及气管置于10%中性福尔马林溶液固定,24h内完成石蜡包埋,常规制备病理切片行HE染色和抗Ⅷ因子免疫组化染色。 2、气道血管密度的计算及形态学参数的测量每个标本观察5张免疫组化切片,每张切片在显微镜(×1000)下于粘膜下层、粘膜固有层处血管尽可能多的区域选10个视野,计数50个视野(1mm2)中阳性反应的管腔样结构的总数作为血管密度(血管数/mm2)。 WP=6 于HE染色病理片上,采用德国Leica Q500MC 图像分析系统,测定不含软骨的完整支气管横断面的基底膜周径Pbm((m)、管壁面积WAt((m2),计算WAt/Pbm((m2/(m)。 3、BALF中VEGF、Endostatin水平的检测 ELISA法检测BALF中VEGF、Endostatin浓度。结果: 1、气管血管密度慢性哮喘组明显高于正常对照组(203.750±24.330/mm2 vs 99.000±20.667/mm2,P0.01)。 2、支气管管壁面积/基底膜周径(WAt/Pbm) 慢性哮喘组明显高于正常对照组(17.09±1.60(m2/(m vs 12.71±1.05(m2/(m,P0.01)。慢性哮喘小鼠支气管上皮细胞增生,基底膜增厚,平滑肌增生以及气道内分泌物积聚。 3、BALF中VEGF、Endostatin水平慢性哮喘组VEGF、Endostatin浓度和VEGF/Endostatin比值均明显高于正常对照组(133.821±14.238pg/ml vs 58.342±18.478pg/ml,3024.550±831.917pg/ml vs 1916.925±412.916pg/ml,均P0.01)。 4、气管血管密度与WAt/Pbm及BALF中VEGF、Endostatin水平的关系慢性哮喘小鼠气道内血管密度与WAt/Pbm(r=0.738,P0.05)、VEGF(r=0.701,P0.01)、VEGF/Endostatin(r=0.562,P0.05)均呈正相关。 5、地塞米松治疗对慢性哮喘小鼠气道血管生成的影响地塞米松治疗组WAt/Pbm〔(14.26±0.99)(m2/(m〕和血管密度(123.625±23.946/mm2)均明显低于慢性哮喘组(均P0.01),高于正常对照组(均P0.05)。与慢性哮喘组相比,VEGF水平明显降低(84.640±17.034pg/ml,P0.01),Endostatin水平(2541.450±402.662pg/ml)无明显变化,VEGF/Endostatin比值明显降低(P0.05)。结论: 1、慢性哮喘小鼠气道血管生成明显增加,且与气道壁厚度呈正相关,提示血管生成可能在哮喘气道重建中具有重要意义。 2、慢性哮喘小鼠BALF中VEGF、Endostatin、VEGF/Endostatin比值均明显升高,且VEGF、VEGF/Endostatin比值与气道血管密度呈正相关,提示哮喘气道血管生成可能 WP=7 与气道内血管生成促进因子和抑制因子比例失衡有关。 3、糖皮质激素能部分抑制慢性哮喘小鼠BALF中VEGF/Endostatin比值升高和气道血管生成,并进而改善慢性哮喘的气道结构重建。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R562.25
【图文】：

病理改变,哮喘,气道上皮细胞

区哮喘的患病率、死亡率呈逐年增高趋势，部分地区增加近 1 倍，对人类健康构成大威胁。因此对哮喘进行进一步研究具有深远的意义[1、2]。目前认为哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T 淋巴细胞、中性粒、气道上皮细胞等）和细胞组份参与的气道慢性炎症性疾病。这些细胞和细胞组份作用形成恶性循环，使气道炎症持续存在，成为哮喘的基本病理改变和反复发作的病理生理机制。在病程早期，解剖学上很少发生器质性改变；长期反复发作将导致结构发生改变，包括气道上皮细胞脱落/增生、基底膜增厚、上皮下纤维化、平滑生/肥大、杯状细胞增生/化生、粘液腺增生/肥大、血管生成/血管重建等，称为气道（图 1），最终导致持续地气道高反应性和不可逆性气道阻塞[1～6]。虽然以吸入性质激素和β2受体激动剂为基础的治疗可以使哮喘发作得到较好的控制，但即使在的早期使用亦不能有效阻止气道重建的进展[4、5]。因此近几年其重要性受到广泛，逐渐成为哮喘研究中的热点。

肺部,小鼠,粘膜下层,支气管

第页20A、B. 正常对照组；C、D. 慢性哮喘组，支气管周围和气管粘膜、粘膜下层炎症细胞浸润显著，以淋巴细胞为主；支气管管壁显著增厚，上皮细胞增生，基底膜增厚，平滑肌增生，管腔内分泌物积聚。气管粘膜固有层、粘膜下层血管明显增多并充血，血管内可见较多红细胞；E、F. 地塞米松治疗组，较 C、D改善，但仍未恢复正常 A、C、E. 肺 HE×100 B、D、F. 气管 HE×1000图 5. 各组小鼠肺部及气管病理改变

【参考文献】