TOLL样受体4等信号分子对人气道平滑肌细胞增殖及合成分泌功能影响的研究

发布时间：2020-07-02 16:28

【摘要】：目的支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞因子参与的慢性气道炎症性疾病,其以气道重构和气道炎症为主要特征。气道重构是哮喘发病的重要环节,但其发病机制至今尚未完全明确。人气道平滑肌细胞(Human airway smooth muscle cells,HASMCs)增生是气道重构的一个重要因素。最新研究发现,HASMCs不仅具有增生肥大的功能,而且在细胞因子与炎症介质的共同刺激下能合成分泌其他炎症介质,作为免疫细胞参与哮喘的发病过程。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)参与多种疾病过程,与哮喘密切相关。我们拟通过建立人体体外被动致敏哮喘模型,观察HASMCs在哮喘状态下的增殖与分泌功能。通过检测HASMCs的增殖反应和分泌的细胞因子,更科学、全面地评价哮喘状态下HASMCs的功能变化,以探讨TLR4相关信号分子对HASMCs增殖和细胞因子合成分泌功能的影响。并且,尝试探讨传统抗疟中药青蒿素与地塞米松对HASMCs TLR4、转化生长因子-β1(Transforming growth factor,TGF-β1)表达及细胞增殖的影响以开拓哮喘中药治疗的新思路。方法通过培养原代HASMCs,建立人体体外被动致敏哮喘模型,使用免疫细胞化学、MTT和ELISA等分子生物学技术,用TNF-α、渥漫青霉素、PDTC和青蒿素等作为工具药,探讨TLR4、PI3K、NF-κB对HASMCs增殖与分泌合成功能的影响。结果 1.与正常对照组相比,被动致敏组HASMCs增殖反应明显增加(P0.01)、总蛋白合成量增高(P0.01)和IgE的分泌水平明显增高(P0.01),成功建立了人体体外被动致敏哮喘模型。 2.与正常对照组相比,被动致敏组HASMCs分泌TGF-β1水平明显增高,差异有显著性(P0.01)。 3.与正常对照组相比较,TNF-α组细胞增殖反应明显增加(P0.01),TLR4明显增高(P0.01),TGF-β1含量明显增高(P0.01)。 4.与正常对照组相比,TLR4抗体组TLR4表达明显减少(P0.01),细胞增殖反应明显减少(P0.01),TGF-β1含量明显降低(P0.01)。 5.与正常对照组相比,TNF-α+渥漫青霉素组、TNF-α+PDTC组细胞增殖反应明显减少(P0.01),TGF-β1含量明显降低(P0.01)。 6.与TNF-α+渥漫青霉素组、TNF-α+PDTC组相比,TNF-α+渥漫青霉素组+PDTC组细胞增殖反应明显减少(P0.05),TGF-β1含量明显降低(P0.05)。 7.与正常对照组相比,TNF-α+青蒿素组、TNF-α+地塞米松组TLR4表达明显减少(P0.01),细胞增殖反应减少(P0.05),TGF-β1含量明显降低(P0.01)。结论 1.被动致敏HASMCs过度增生、蛋白合成能力显著增强和大量IgE的分泌,提示本实验成功建立了人体体外被动致敏哮喘模型;微环境的显著改变,可能是导致气道重建的重要因素之一。 2.HASMCs增生是气道重构的一个显著特征。TNF-α能够激活HASMCs表面TLR4并且上调其的表达,从而增强HASMCs的增殖和TGF-β1合成分泌功能。HASMCs的过度增殖和大量TGF-β1的释放,可能是导致哮喘气道重构的病理学基础之一。 3.TLR4抗体能够抑制哮喘HASMCs的增殖和TGF-β1的合成分泌功能,可能具有逆转或延缓哮喘气道重构的作用。 4.TLR4与PI3K、NF-κB具有调控HASMCs合成分泌TGF-β1的功能,同时抑制PI3K和NF-κB可以显著抑制细胞增殖和减少炎症因子的分泌,由此可见TLR4相关信号分子的激活可能是哮喘气道重构的发病机制之一。 5.青蒿素和地塞米松均可通过下调HASMCs表面TLR4表达从而抑制HASMCs增殖和分泌TGF-β1功能,也许对哮喘气道重构具有一定治疗作用。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R562.25
【图文】：

第4代HASMCs

TOLL样受体4等信号分子对人气道平滑肌细胞增殖及合成分泌功能影响的研究

第4代HASMCsFig.1-14thgenerationHASMCsFig.1-24thgenerationHASMCs

【参考文献】