miR-29b对与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞抗纤维化作用的研究

发布时间：2020-07-22 19:23

【摘要】：目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性进展性的病因不明的肺部疾病,且缺乏有效的治疗手段。过多的肺成纤维细胞、肌成纤维细胞聚集和细胞外基质的过度沉积是IPF的重要病理特点。micro RNA是一种小分子非编码的RNA,在体内众多生理病理过程中扮演重要的角色。研究表明micro RNA同样参与IPF的发病机理。本研究通过观察mi R-29b对与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)合成I型胶原蛋白(Collagen I,Col I)的影响,探讨其在抗肺纤维化中的作用,为探寻IPF新的治疗靶点提供一定的研究依据。方法应用Transwell小室构建MRC-5与A549细胞跨室共培养模型,利用脂质体介导法将mi R-29b转染至MRC-5细胞以及使用TGF-β1刺激相应细胞组,并设空白对照组,TGF-β1刺激组,mi R-29b阴性转染对照+TGF-β1刺激组,mi R-29b转染+TGF-β1刺激组,mi R-29b转染组。通过实时定量PCR法检测各组细胞中Col I和mi R-29b的m RNA相对表达水平。Western blotting法检测各组细胞中Col I蛋白表达水平。结果(1)PCR检测分析显示,与空白对照组相比,mi R-29b在转染组表达水平增加了127倍(P0.01),使用Lipofectamin2000在MRC-5细胞转染组中过表达mi R-29b成功。(2)通过PCR检测分析显示与TGF-β1刺激组和mi R-29b阴性转染+TGF-β1刺激组相比,mi R-29b转染+TGF-β1刺激组中Col I表达降低(P0.05)。(3)Western blotting法检测各组细胞Col I蛋白表达,mi R-29b转染+TGF-β1刺激组中Col I表达较TGF-β1刺激组和mi R-29b阴性转染+TGF-β1刺激组相比表达降低(P0.05)结论实验表明在mi R-29b转染的MRC-5细胞中存在过表达mi R-29b,后者可减少与A549细胞共培养的MRC-5细胞TGF-β1刺激后Col I蛋白表达水平,进而减少细胞外基质的合成,显示对肺纤维化有潜在的抑制作用。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563

【相似文献】