目的:急性肺损伤(acute lung injury, ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是指心源性以外各种肺内外致病因素(严重感染、创伤、休克等)导致的急性、进行性、顽固性呼吸衰竭。脓毒症(sepsis)是ALI/ARDS最主要的致病因素,ALI/ARDS是全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)在肺脏发生发展的恶化。ARDS的一个标志就是肺泡上皮细胞细胞外基质(extracellar matrix, ECM)的破坏,最近的研究表明,基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases, MMPs)能够降解ECM,可能促进了急性肺损伤的发展。MMP-9属于MMPs家族中的一种,被称为Ⅳ型胶原酶(也称明胶酶B),能够降解基底膜成分,包括Ⅳ型胶原,纤维结合素和明胶。MMP-9活性的升高能够大量的降解肺泡上皮细胞外基质,引起急性肺损伤的发生。 乌司他丁是从人尿中提取出来的一种蛋白酶抑制剂,具有抑制白细胞聚集、抑制白细胞释放蛋白酶、稳定溶酶体膜、抑制过量超氧化物的生成和清除产生的超氧化物、清除氧自由基、抑制炎症介质释放、减少细胞与组织损伤等药理作用。 我们推测乌司他丁在急性炎症打击比如脓毒症过程中能够降低MMP-9的活性,从而减轻肺泡细胞外基质的降解。在本实验研究中,通过对脓毒症大鼠肺湿干重比、血清MMP-9浓度及肺脏组织MMP-9 mRNA表达水平的影响并结合肺脏形态学及超微结构的变化,探讨乌司他丁对肺脏的保护作用及其作用机制。 方法:本研究应用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture, CLP)复制严重感染动物模型,选用雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠90只,体重在250-300g之间,分为3组:假手术组(Sham group, n=30)、盐水组(NS group, n=30)乌司他丁组(UTI group, n=30)。假手术组只开腹,牵拉盲肠但不结扎;盐水组行CLP后给予生理盐水10mL/Kg体重腹腔注射;乌司他丁组行CLP后给予乌司他丁10万U/Kg腹腔注射,浓度为1万U/mL。每组动物按时间点分为5个亚组(n=6),在CLP术毕0.5h、1.5h、3h、6h和12h观察大鼠一般情况的变化并处死动物。按时间点处死动物后,3h组留取右肺下叶组织,HE染色法光镜观察肺脏形态学改变,透射电镜观察肺脏的超微结构。留取左肺组织,RT-PCR半定量测定肺组织中MMP-9 mRNA的表达。在6h动物处死后,开胸取右肺中叶,吸干表面水分,再置于85℃烤箱中24小时至恒重,称干重,计算肺湿干重比(W/D)。通过颈总动脉插管取血2mL,离心后取上清,-80℃保存,ELISA法测定血清中MMP-9的浓度。 数据采用SPSS11.5版软件包(SPSS Company, Chicago, Illinois, USA)进行统计分析,比较肺湿干重比、血清MMP-9浓度及肺组织MMP-9 mRNA表达水平的变化。采用完全单因素的方差分析,方差不齐时采用非参数的秩和检验。P0.05认为差异有显著性,P0.01认为统计学上有非常显著差异。 结果 1 CLP术后一般情况的观察:假手术组大鼠苏醒较早,清醒后活动基本如常,剖腹未见恶臭,腹腔水肿等表现。盐水组大鼠术后均有严重的脓毒症表现:苏醒延迟,逐渐出现精神萎靡,竖毛及呼吸困难等表现,剖腹可见恶臭味血性渗液,肠管水肿,部分盲肠坏死变黑。与盐水组大鼠相比,乌司他丁组动物临床表现较轻。 2脓毒症大鼠肺组织湿干重比(W/D)变化:与假手术组相比,CLP术后6小时盐水组肺组织W/D比显著增加(5.15±0.11 vs 4.54±0.16, P0.01);与盐水组相比,CLP术后6小时乌司他丁组肺组织W/D比显著减少(4.74±0.08 vs 5.15±0.11, P0.01)。 3肺脏形态学及超微结构变化:HE染色光镜下观察到假手术组大鼠肺组织结构完整,肺泡间隔无水肿,肺泡腔清晰;盐水组肺泡间隔增宽,肺间质充血,水肿,肺泡腔可见大量中性粒细胞浸润,可见不同程度的肺不张,代偿性肺气肿等;乌司他丁组改变明显减轻但较假手术组重。电镜下观察假手术组细胞绒毛、线粒体、板层小体正常;盐水组Ⅱ型肺泡上皮细胞线粒体大部分嵴,部分膜融合或消失,粗面内质网轻度扩张,脱颗粒现象明显,微绒毛数量显著减少,板层小体排空现象明显;乌司他丁组形态学及超微结构改变与盐水组相比均明显减轻。 4大鼠血清MMP-9浓度检测结果:与假手术组相比,盐水组血清MMP-9浓度在各个时间点均显著升高(0.5h: 2895.8±268.4 pg/ml vs 2090.8±282.1pg/ml, P0.01; 1.5h: 2884.7±176.9pg/ml vs 2292.4±157.0pg/ml, P0.01; 3h: 2986.7±144.5pg/ml vs 2191.4±348.8pg/ml, P0.01; 6h: 3096.3±384.9pg/ml vs 1957.3±286.5pg/ml, P0.01; 12h: 2993.1±208.2pg/ml vs 1887.5±176.1pg/ml, P0.01);与盐水组相比,乌司他丁组血清MMP-9浓度在各个时间点均显著下降(0.5h: 2428.9±166.7 pg/ml vs 2895.8±268.4 pg/ml, P0.05; 1.5h: 2437.5±375.4pg/ml vs 2884.7±176.9 pg/ml, P0.05; 3h: 2520.4±213.1pg/ml vs 2986.7±144.5 pg/ml, P0.05; 6h: 2616.4±182.5pg/ml vs 3096.3±384.9 pg/ml, P0.05; 12h: 274.9±148.7pg/ml vs 2993.1±208.2 pg/ml, P0.01);与假手术组相比,乌司他丁组血清MMP-9浓度在0.5h组、1.5h组和3h组无统计学差异(0.5h: 2428.9±166.7pg/ml vs 2090.8±282.1pg/ml, P0.05; 1.5h: 2437.5±375.4 pg/ml vs 2292.4±157.0pg/ml, P0.05; 3h: 2986.7±144.5 pg/ml vs 2191.4±348.8 pg/ml, P0.05),而在6h组和12h组血清MMP-9浓度显著升高(6h: 2616.4±182.5pg/ml vs 1957.3±286.5pg/ml, P0.05; 12h: 274.9±148.7pg/ml vs 1887.5±176.0pg/ml, P0.01)。 5大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达结果:与假手术组相比,盐水组MMP-9 mRNA表达在各个时间点均显著增加(3h: 0.833±0.115 vs 0.435±0.043, P0.01; 6h: 0.883±0.034 vs 0.338±0.035, P0.01; 12h: 0.853±0.023 vs 0.253±0.032, P0.01);与盐水组相比,乌司他丁组MMP-9 mRNA表达在各个时间点均显著下降(3h: 0.610±0.080 vs 0.833±0.115, P0.05; 6h: 0.470±0.092 vs 0.883±0.034, P0.01; 12h: 0.468±0.013 vs 0.853±0.023, P0.01);与假手术组相比,乌司他丁组MMP-9 mRNA表达在各个时间点均显著增加(3h: 0.610±0.080 vs 0.435±0.043, P0.05; 6h: 0.470±0.092 vs 0.338±0.035, P0.05; 12h: 0.468±0.013 vs 0.253±0.032, P0.01)。 结论 1 CLP法能够成功复制大鼠脓毒症模型。 2 MMP-9与炎症反应的程度密切相关,随着炎症反应的加重,其浓度不断升高;MMP-9与肺损伤密切相关,肺损伤越严重,MMP-9活性越高。 3乌司他丁能够减少肺组织MMP-9 mRNA的表达,降低血清MMP-9的浓度,从而减轻肺损伤,保护肺功能。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R459.7;R563.8
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 李淑芳;熊旭东;;脓毒症凝血功能障碍中西医研究进展[J];中国中医急症;2011年07期
2 黄增峰;黄学仄;方春;陈如康;;参麦注射液对脓毒症患者凝血功能的影响[J];中国中医药科技;2011年04期
3 童飞;胡德林;余又新;王春华;方林森;徐庆连;;盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠巨噬细胞炎症蛋白-1α水平变化的研究[J];安徽医药;2011年09期
4 谢东平;韩云;李芳;杜炯栋;;内科脓毒症基本证候要素的分布特点[J];福建中医药;2011年03期
5 ;脓毒症及急诊相关热点问题新进展学习班通知[J];解放军医学杂志;2011年07期
6 李小平;殷俊;贺文龙;杨茜;朱卫平;;脓毒症及其治疗策略的探讨[J];检验医学与临床;2011年13期
7 陈忠华;蒋宗明;陈雷;陈念平;郑羡河;胡双燕;;6%羟乙基淀粉130/0.4对脓毒症患者血浆中细胞因子水平的影响[J];中国药房;2011年26期
8 李成强;常毓颖;沈勤康;;脓毒症的中医药治疗研究进展[J];中国中医急症;2011年07期
9 唐宇;;重症脓毒症合并MODS1例救治体会[J];吉林医学;2011年20期
10 张爽;赵英萍;梁锦云;黄胜启;杜云波;陈炎堂;;血N末端B型利钠肽原水平对脓毒症患者的治疗及预后判断[J];中华临床医师杂志(电子版);2011年09期
相关会议论文 前10条
1 雒云祥;周领;任新生;;脓毒症与肠屏障功能障碍研究现状[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
2 王新华;周荣斌;冬兰;王玉红;周高速;吴航宇;张源波;张平;;老年脓毒症的临床特点及免疫病理[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
3 刘清泉;;中医对脓毒症的认识及辩证体系的研究[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
4 卢中秋;李萌芳;梁欢;邱俏檬;杨光田;周铁丽;洪广亮;;创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因动态表达及抗菌药物的干预[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
5 赵淳;;脓毒症的中西医结合诊治[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
6 王军宇;李春盛;;脓毒症患者急性肾损伤早期的标志物[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
7 盛志勇;;脓毒症研究新认识[A];“2008灾害创伤与急救新进展”学术交流会学术论文集[C];2008年
8 刘清泉;刘红旭;任爱民;江其敏;;血必净注射液治疗脓毒症(瘀毒互结证)随机、平行对照、多中心临床研究[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
9 赵擎宇;贾清颜;苏全冠;M WEIGAND;E MARTIN;;影响脓毒症病人生存的临床因素分析[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
10 方向明;;中国重症脓毒症的临床诊治[A];2009年浙江省麻醉学学术会议论文汇编[C];2009年
相关重要报纸文章 前10条
1 陶锦琰;脓毒症的克星——齐格里斯[N];中国医药报;2001年
2 首都医科大学附属北京朝阳医院急诊科主任 李春盛;脓毒症需采用综合治疗策略[N];中国医药报;2009年
3 北京中医药大学东直门医院急诊科;基于四个环节辨治脓毒症[N];中国医药报;2009年
4 本报记者 任壮;聚焦脓毒症治疗策略[N];中国中医药报;2010年
5 张献怀;中药血必净防治脓毒症机制初步揭示[N];健康报;2010年
6 张献怀;中药血必净防治脓毒症机制被揭示[N];中国中医药报;2010年
7 特约记者 石谙丁;小儿脓毒症抗菌要领(二)[N];医药经济报;2011年
8 特约记者 石谙丁;小儿脓毒症抗菌要领(一)[N];医药经济报;2011年
9 ;误解与事实[N];中国医药报;2003年
10 尹东;中西医结合提高脓毒症防治水平[N];健康报;2008年
相关博士学位论文 前10条
1 虞立霞;基于候选基因的肝癌、鼻咽癌和脓毒症的遗传关联研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
2 李岩;淋巴液引流技术改进及脓毒症大鼠淋巴液的代谢组学研究[D];第二军医大学;2011年
3 刘绍泽;广谱抗生素压力下脓毒症大鼠肠道菌群变化及耐药基因播散的实验研究[D];第二军医大学;2010年
4 王涛;新的内毒素结合蛋白CRISPLD2在脓毒症中的表达及其意义[D];第二军医大学;2012年
5 薄禄龙;抗CTLA-4抗体对脓毒症小鼠免疫功能及生存率影响的研究[D];第二军医大学;2011年
6 陈德昌;大黄对肠源性脓毒症防治的基础与临床研究[D];第二军医大学;2003年
7 林旭峰;CD14基因启动子区多态性与脓毒症发病及预后相关性的Meta分析[D];复旦大学;2012年
8 于泳浩;重型脓毒症状态下的免疫平衡与调节[D];天津医科大学;2003年
9 谢东平;中医集束化调肠方案干预脓毒症肠功能障碍的临床研究[D];广州中医药大学;2010年
10 朱兰芳;TLR4信号通路基因SNPs与脓毒症易感性的相关性研究[D];复旦大学;2012年
相关硕士学位论文 前10条
1 周莹;PD-1/PD-L1途径在脓毒症T淋巴细胞和单核细胞中的作用及机制研究[D];第二军医大学;2010年
2 王强;脓毒症大鼠JAK/STAT信号通路活化及其与肿瘤坏死因子-α表达的关系[D];第四军医大学;2004年
3 卢骁;低分子肝素抗炎性凝血效应对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用[D];第二军医大学;2010年
4 赵浩东;盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠早期肝脏血管内皮细胞和肝损伤变化及其相关性研究[D];安徽医科大学;2011年
5 陈朴;乌司他丁对重症脓毒血症的疗效及作用机制的研究[D];浙江大学;2004年
6 吴洁莹;氯胺酮及胰岛素增敏剂对腹腔感染脓毒症小鼠的作用[D];暨南大学;2002年
7 王伟荣;肺炎相关性脓毒症的临床特点及中医证候研究[D];广州中医药大学;2011年
8 孔怡淳;血清前降钙素在危重病中对脓毒症的早期诊断作用[D];天津医科大学;2002年
9 杨治力;甲状腺激素对脓毒症大鼠肠屏障保护作用的研究[D];中南大学;2003年
10 黄华经;清气凉营汤治疗脓毒症的研究[D];广州中医药大学;2008年
本文编号：
2810441
