特布他林对A549细胞吞噬凋亡嗜酸性粒细胞及分泌IL-6和IL-8的影响

发布时间：2020-11-20 18:47

　　 背景: 嗜酸粒性细胞是支气管哮喘发病机制中的主要效应细胞,与哮喘气道炎症、气道重塑及气道高反应性有关,因而清除嗜酸粒性细胞对哮喘炎症的控制起着重要作用。研究表明肺部嗜酸粒性细胞可通过凋亡后被巨噬细胞或气道上皮细胞吞噬而被清除,由于它们是被完整地吞噬和清除,从而防止细胞内炎性介质和毒性内容物的泄漏,对哮喘炎症的控制具有重要意义。 β_2-受体激动剂是治疗支气管哮喘的有效药物,近年来研究表明β_2-受体激动剂除具有舒张支气管的作用外,还有一定的抗炎作用,但具体机制不明。 已有文献报道地塞米松可以上调上皮细胞吞噬凋亡嗜酸粒性细胞的能力,并存在浓度依赖效应,而一些升高细胞内cAMP水平的药物也可以促进细胞吞噬。对同为治疗支气管哮喘有效的药物,β_2-受体激动剂是否可以对上皮细胞吞噬凋亡嗜酸粒性细胞产生作用还不清楚。虽然已有文献报道β_2-受体激动剂可以抑制一些炎性因子的分泌,但β_2-受体激动剂对上皮细胞吞噬凋亡的嗜酸粒性细胞的干预作用是否与抑制炎性因子的分泌相关还未见报道。研究特布他林对上皮细胞吞噬凋亡嗜酸粒性细胞的作用及对IL-6、IL-8分泌的影响,目的是进一步探讨β_2-受体激动剂在治疗支气管哮喘中的作用机制。 目的: 1)探讨特布他林对A549细胞吞噬凋亡嗜酸粒性细胞的作用,并了解有无浓度和时间依赖的关系。 2)观察A549细胞吞噬凋亡嗜酸粒性细胞后释放IL-6、IL-8的变化情况。 3)探讨特布他林对脂多糖刺激的A549细胞分泌IL-6、IL-8有无抑制作用,是否存在浓度依赖关系。 方法: 用磁细胞分离柱和CD15、CD16免疫磁珠抗体分离正常人外周静脉血中的嗜酸粒性细胞,培养48小时后通过形态学和AnnexinV-FITC凋亡试剂盒进行嗜酸粒性细胞凋亡鉴定。凋亡嗜酸粒性细胞与不同时间、浓度特布他林干预的A549细胞共培养1小时,培养结束后凋亡嗜酸粒性细胞用邻联茴香胺进行过氧化物酶染色,A549细胞用苏木素加以核衬染。Olympus倒置显微镜及DiagnosticInstruments-Spot insight数字图象采集摄像系统动态观察吞噬现象,光镜下进行吞噬率统计。A549细胞分别与凋亡嗜酸粒性细胞、脂多糖、脂多糖和不同浓度特布他林共培养,放射免疫法检测上清液IL-6、IL-8的浓度。 结果: 1)A549细胞分别被特布他林干预1、2、3小时后,其吞噬能力随时间延长而下降。 2)A549细胞在特布他林以10μmol/L浓度干预时吞噬能力最低,且吞噬能力随着浓度的降低而升高,但以0.1μmol/L浓度干预时无显著的抑制作用。 3)吞噬凋亡嗜酸粒性细胞的A549细胞与未吞噬的A549细胞比较,IL-6和IL-8的分泌没有显著差异,但脂多糖显著刺激A549细胞分泌IL-6和IL-8。 4)特布他林抑制脂多糖诱导的A549细胞分泌IL-6、IL-8,且存在浓度依赖关系。 结论: 1)特布他林以时间、浓度依赖的方式抑制A549细胞吞噬凋亡的嗜酸粒性细胞。 2)特布他林通过抑制炎性状态下的A549细胞分泌IL-6、IL-8发挥一定的抗炎作用,并具有浓度依赖效应。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R562.25
【部分图文】：

图1A549细胞吞噬凋亡嗜酸性粒细胞(x4OO)FiglA549eellsengulfaPoptotieeosinophils(x400)爪么每分’、‘像…诱图2特布他林干预后的A549细胞吞噬凋亡嗜酸性粒细胞(x400)

apoptotieeosinophils(x400)淡蓝色的为A549细胞，棕褐色的为被吞噬的凋亡嗜酸性粒细胞，图2与图1比较，吞噬凋亡嗜酸性粒细胞的A549细胞明显减少。

3.2特布他林以时间和浓度依赖的方式抑制A549细胞吞噬凋亡的嗜酸性粒细胞观察A549细胞在特布他林(0.1、1、 10pmol/L)作用不同干预时间(lh、Zh、3h)后吞噬凋亡的嗜酸性粒细胞能力变化，如图3所示，相同干预时间组内，与对照组相比，特布他林抑制A549细胞吞噬凋亡嗜酸性粒细胞(P<O.05)，并且特布他林对A549细胞吞噬能力的干预，存在浓度依赖关系。但特布他林 (0.1pmol/L)无显著抑制作用(P>0.05)。相同干预浓度组内，特布他林以时间依赖的方式干预A549细胞的吞噬。opmollL 0.1pmol/L目mollL10目mol/L酬10七5︵次)2h卜预时问图3特布他林对A549细胞吞噬嗜酸性粒细胞的作用 Fig3TheeffeetsofterbutalinetoA549eellsengulfingaPoPtotieeosinoPhils注:与对照组(0协mol/L)比较*P<0.05，**P(0.01。lh组内:特布他林 (1pmol/L)与特布他林 (10pmol/L)比较，P二0.046;Zh组内:特布他林 (1pmol/L)与特布他林(10“mol/L)比较
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本文编号：2891832