NLRC5通过NF-κB与p38 MAPK通路调控肺泡巨噬细胞炎症因子分泌的机制研究

发布时间：2024-07-02 00:12

　　急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种非心源性的各种病因素导致的急性炎症性疾病,可一步发展至严重阶段被称为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。其进展较快,晚期多诱发或并发多脏器功能障碍综合征。急性肺损伤因其约40%的高病死率使其仍为广受关注的疾病。国内外对急性肺损伤发病机制的研究较多,但至今尚未完全了解其发病机制,尤其在细胞和分子基因水平更是缺乏系统的研究。对于急性肺损伤的治疗,至今临床上仍缺乏有效特异的手段,多为对症支持治疗为主。因此,深入研究急性肺损伤的发病机制,寻求基因治疗的新靶点,可为临床开发治疗急性肺损伤的靶向药物提供新的思路。急性肺损伤的发病机制较为复杂,很难用单一的细胞通路进行全面解释。对其理解也不能局限于单纯意义上的肺脏本身病变,而是全身炎症反应综合征在肺部的表现,其发病基础是“炎症”。炎症反应在急性肺损伤的发生发展中占据核心位置,其发生通过信号转导通路活化炎症细胞释放大量炎症细胞因子,一直以来是国内外研究的热点。急性肺损伤中参与的炎症细胞之一肺泡巨噬细胞的活化在其发生发展中非常关键。肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AM)作为...

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ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
    2.1 实验动物
    2.2 药品与试剂
    2.3 仪器与设备
    2.4 溶液和试剂的配制
3 实验方法
    3.1 LPS诱导 ALI 小鼠模型的建立、实验分组
    3.2 小鼠原代肺泡巨噬细胞分离、培养、鉴定
    3.3 小鼠血清和肺组织标本采集
    3.4 小鼠肺湿干重比
    3.5 小鼠髓过氧化物酶检测
    3.6 小鼠肺组织病理形态学检查
    3.7 免疫荧光制片检测小鼠肺组织中NLRC5的表达
    3.8 免疫荧光双染
    3.9 细胞培养
    3.10 细胞转染
    3.11 PDTC处理细胞
    3.12 SB203580处理细胞
    3.13 qRT-PCR
    3.14 Westernblot
    3.15 ELISA法检测TNF-α、IL-1β和IL-6的释放水平
    3.16 统计学分析
4.实验结果
    4.1 NLRC5在急性肺损伤肺组织中的表达
        4.1.1 小鼠基本情况
        4.1.2 肺组织病理形态学改变
        4.1.3 肺脏湿干比测定
        4.1.4 肺组织MPO活性测定
        4.1.5 NLRC5在小鼠ALI模型中肺组织中的表达
        4.1.6 在小鼠ALI模型肺组织中NLRC5、CD68共定位于活化的肺泡巨噬细胞
        4.1.7 原代培养和鉴定小鼠肺泡巨噬细胞
        4.1.8 NLRC5在小鼠ALI原代肺泡巨噬细胞中的表达
        4.1.9 小鼠ALI支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达
        4.1.10 小鼠ALI血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达
        4.1.11 小鼠ALI肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达
        4.1.12 小鼠ALI原代肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达
    4.2 NLRC5对LPS诱导的MH-S细胞因子分泌的影响
        4.2.1 LPS对MH-S细胞中NLRC5的表达影响
        4.2.2 过表达NLRC5对LPS诱导的MH-S细胞分泌炎症细胞因子分泌的调控
        4.2.3 NLRC5siRNA对LPS诱导的MH-S细胞分泌炎症细胞因子分泌的调控
    4.3 NLRC5对LPS诱导MH-S细胞中NF-κB与p38MAPK信号通路的作用研究
        4.3.1 NLRC5对LPS诱导MH-S细胞中NF-κB信号通路的调控作用
        4.3.2 NLRC5对LPS诱导MH-S细胞中p38MAPK信号通路的调控作用
    4.4 抑制剂对NLRC5表达的影响
        4.4.1 PDTC对NLRC5表达的影响
        4.4.2 SB203580对NLRC5表达的影响
5.讨论
6.结论
参考文献
附录
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3999400