三氧化二砷调控气道上皮细胞表达MAL及STAT6的研究

发布时间：2017-06-01 03:06

  本文关键词：三氧化二砷调控气道上皮细胞表达MAL及STAT6的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨三氧化二砷调控气道上皮细胞表达T细胞成熟相关蛋白(MAL)及信号转导和转录激活因子6(STAT6)的干预作用及分子机制。方法:将32只雄性SD大鼠分为正常对照组、哮喘组及三氧化二砷组,制备正常血清、哮喘血清及三氧化二砷含药血清,将大鼠气道上皮细胞(Rat Trachea Epithelial,RTE)分为正常对照组、哮喘组三氧化二砷组、抑制剂AG490组(以下简称AG490组)、砷剂+哮喘血清组。分别与RTE共培养,以免疫蛋白印迹法(Western-blot,WB)检测:信号转导和转录激活因子6(STAT6),嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)和MAL在RTE中的表达;半定量RT-PCR检测RTE中STAT6,Eotaxin,MAL的m RNA的表达。结果:HE染色显示:正常大鼠气道及肺泡周围无炎性细胞浸润;哮喘大鼠支气管及肺泡间质周围有大量嗜酸性细胞、淋巴细胞浸润,部分气道上皮脱落,气道平滑肌增厚,基底膜增厚,气道壁增厚,气道管腔狭窄。免疫印迹法蛋白定量分析结果:STAT6蛋白的OD值哮喘组明显高于正常对照组差异有显著性(f=315.74,p=0.004);AG490组STAT6蛋白的OD值最低,明显低于其他4组差异有显著性(f=3245.67,p=0.001);三氧化二砷含药血清+哮喘血清组STAT6蛋白的OD值较哮喘组明显降低,差异有显著性(f=152.91,p=0.006);三氧化二砷组较正常对照组STAT6蛋白的OD值,差异有显著性(F=110.66,P=0.007)各组STAT6的OD值分别为:正常对照组0.57±0.02、哮喘组0.73±0.01、三氧化二砷组0.46±0.03、AG490组0.06±0.01、三氧化二砷含药血清+哮喘血清组0.64±0.02。Eotaxin蛋白的OD值哮喘组较正常对照组明显增高,差异有显著性(f=3164.05,p=0.001);三氧化二砷含药血清+哮喘血清组Eotaxin蛋白的OD值较哮喘组明显降低,差异有显著性(f=1224.65,p=0.003);其余两组Eotaxin蛋白的OD值相似,差异无显著性(f=7.35,p=0.06)。各组Eotaxin的OD值分别为:正常对照组0.26±0.02、哮喘组1.15±0.03、三氧化二砷组0.92±0.01、AG490组0.93±0.03、三氧化二砷含药血清+哮喘血清组0.67±0.02。MAL蛋白的OD值哮喘组较正常组明显降低,差异有显著性(f=953.93,p=0.003);三氧化二砷含药血清+哮喘血清组MAL蛋白的OD值较哮喘组明显升高,差异有显著性(f=177.96,p=0.006);三氧化二砷含药血清+哮喘血清组MAL蛋白的OD值较正常对照组稍降低,差异有显著性(F=162.58P=0.006)。各组MAL蛋白的OD值分别为:正常对照组1.08±0.06、哮喘组0.24±0.03、三氧化二砷组0.20±0.03、AG490组0.84±0.05、三氧化二砷含药血清+哮喘血清组0.46±0.03。RT-PCR半定量分析:STAT6的m RNA相对灰度值测定:哮喘组STAT6 m RNA的相对灰度值较正常对照组明显增高,差异有显著性(f=374.56,p=0.005);哮喘组STAT6 m RNA的相对灰度值较AG490组明显增高,差异有显著性(f=109.25,p=0.007);哮喘组STAT6m RNA的相对灰度值较三氧化二砷含药血清+哮喘血清组明显增高,差异有显著性(f=76.71,p=0.008)。各组STAT6的m RNA相对灰度值分别为:正常对照组:0.40±0.07、哮喘组:0.95±0.08、三氧化二砷含药血清组0.48±0.06、AG490组0.54±0.06、三氧化二砷含药血清+哮喘血清组0.78±0.08。Eotaxin的m RNA相对灰度值测定结果:哮喘组Eotaxin m RNA的相对灰度值较正常对照组明显增高,差异有显著性(f=325.87,p=0.005);哮喘组与三氧化二砷组相比较Eotaxin m RNA的相对灰度值明显升高,差异有显著性(f=321.476,p=0.005);哮喘组与三氧化二砷含药血清+哮喘血清组相比较Eotaxin m RNA的相对灰度值明显升高,差异有显著性(f=35.54,p=0.008);正常对照组与三氧化二砷含药血清+哮喘血清组相比较差异有显著性(f=230.70,p=0.005)。各组Eotaxin的m RNA相对灰度值分别为:正常对照组:0.44±0.06、哮喘组:0.87±0.07、三氧化二砷含药血清组0.61±0.17、AG490组0.53±0.15、三氧化二砷含药血清+哮喘血清组0.52±0.12。MAL的m RNA相对灰度值测定结果:哮喘组MAL的m RNA相对灰度值较正常对照组明显降低,差异有显著性(f=300.26,p=0.004);三氧化二砷组MAL的m RAN相对灰度值较正常对照组差异无显著性(f=1155.61,p=0.003);三氧化二砷含药血清+哮喘血清组m RNA相对灰度值较哮喘组明显升高,差异有显著性(f=158.05,p=0.007);三氧化二砷含药血清+哮喘血清组m RNA相对灰度值较正常对照组差异无显著性(f=2.12,p=0.92)。各组MAL的m RNA相对灰度值分别为:正常对照组:0.82±0.07、哮喘组:0.53±0.10、三氧化二砷含药血清组0.51±0.05、AG490组0.79±0.17、三氧化二砷含药血清+哮喘血清组0.78±0.06。结论:1.哮喘血清能诱导气道上皮细胞Eotaxin和STAT6高表达,MAL低表达。2.三氧化二砷可抑制气道上皮细胞对Eotaxin的表达,上调MAL的表达,其作用机制可能与抑制JAK-STAT6信号通路有关。
【关键词】：哮喘血清 三氧化二砷含药血清 Eotaxin STAT6 MAL
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 主要缩略语中英文索引5-7
• 摘要7-11
• Abstract11-16
• 第1章 前言16-18
• 第2章 实验材料18-21
• 第3章 实验方法21-29
• 第4章 实验结果29-36
• 第5章 讨论36-40
• 第6章 结论40-42
• 参考文献42-46
• 综述46-52
• 参考文献50-52
• 硕士期间发表论文及参与课题52
• 课题资助情况52-53
• 致谢53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 孙金铃;邓骏杰;陈颖毅;;信号转导与转录激活因子3:非多肽类小分子抑制剂[J];上海交通大学学报(医学版);2015年02期

  本文关键词：三氧化二砷调控气道上皮细胞表达MAL及STAT6的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：411431