ADAMTS-1对博莱霉素所致小鼠肺成纤维细胞纤维分化的影响

发布时间：2017-06-01 03:07

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【摘要】：目的： 研究Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS-1）对博莱霉素（BLM）诱导的小鼠肺成纤维细胞纤维分化的影响及其机制。 方法： 1.建立肺纤维分化模型：培养小鼠肺成纤维细胞，24小时后在培养基中加入浓度为10vg/ml的博莱霉素，，作用24小时后观察小鼠肺成纤维细胞纤维分化后的形态并成像； 2.ADAMTS-1作用小鼠肺成纤维细胞：小鼠肺成纤维细胞培养、传代，种植在六孔板内，设置6组实验：1组（对照组）；2组（博莱霉素20vg）；3组（博莱霉素20vg+ADAMTS-11vg）；4组（博莱霉素20vg+ADAMTS-12vg）；5组（博莱霉素20vg+ADAMTS-14vg）；6组（ADAMTS-14vg）。各实验组均在无菌温箱内培养，加入不含胎牛血清的培养基饥饿处理细胞24小时后，1组和6组加入不含胎牛血清培养基2ml；其余各组均加博莱霉素（1mg/ml）20vl和不含胎牛血清培养基1.98ml。于无菌温箱培养24小时，24小时后3组加入1vgADAMTS；4组加入2vg ADAMTS；5组加入4vg ADAMTS；6组加入4vgADAMTS。再置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养24小时。 3.检测方法：分别取6组实验细胞上清液进行酶联免疫吸附法检测各组CTGF、COL1的浓度；分别收集6组实验细胞用实时定量PCR法检测各组CTGF、COL1的mRNA表达量；分别收集6组实验细胞Western Blot检测各组CTGF、COL1的表达情况。 结果： 1.成功建立小鼠肺成纤维细胞纤维分化模型，与正常小鼠肺成纤维细胞相比，博莱霉素处理组小鼠肺成纤维细胞纤维分化程度增加。 2.酶联免疫吸附法检测结果显示博莱霉素组（2组）细胞培养基上清液中CTGF、COL1的浓度明显高于其它各组；实验3、4、5组随ADAMTS-1用量的增加细胞培养基上清液中CTGF、COL1的浓度依次递减；ADAMTS-1组（6组）细胞培养基上清液中CTGF、COL1的浓度最低（P0.05）。 3.实时定量PCR法检测结果显示博莱霉素组（2组）细胞中CTGF、COL1的mRNA表达量最高；实验3、4、5组随ADAMTS-1用量的增加细胞中CTGF、COL1的mRNA表达量依次递减；ADAMTS-1组（6组）细胞中CTGF、COL1的mRNA表达量最低（P0.05）。 4.Western Blot检测结果显示博莱霉素组（2组）细胞中CTGF、COL1的蛋白表达量最高；实验3、4、5组随ADAMTS-1用量的增加细胞中CTGF、COL1的蛋白表达量依次递减；ADAMTS-1组（6组）细胞中CTGF、COL1的蛋白表达量最低（P0.05）。 结论： ADAMTS-1能降低博莱霉素所致的小鼠肺成纤维细胞中COL1、CTGF的含量，其降低程度与其剂量成正比。
【关键词】：肺成纤维细胞 ADAMTS-1 CTGF COL1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 主要缩略语4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 材料12-17
• 方法17-23
• 结果23-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述37-45
• 参考文献41-45
• 攻读硕士学位期间发表论文情况45-46
• 致谢46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：411440