b-FGF在诱导上皮间质化过程中对Notch1及Hes1表达的影响

发布时间：2017-06-08 18:07

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【摘要】：目的探讨Notch信号通路中相关信号分子在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)诱导肺泡上皮细胞A549间质转化过程中的表达情况,进一步明确b-FGF诱导上皮间质转分化的分子机制,为肺纤维化治疗提供新的靶点。方法体外常规培养A549细胞株,使其生长至对数期,应用无血清培养基同步化培养12h后,分成四组:A组即空白对照组;B组即b-FGF(10ng/ml)组:向细胞培养液中加入b-FGF,使其终浓度为10ng/m1;C组即b-FGF+DAPT组:向细胞培养液中加入b-FGF,使其终浓度为10ng/m1同时加入DAPT(Notch信号通路抑制剂)使其终浓度为100nmol/m1;D组即DAPT组:正常培养的A549加入DAPT(Notch信号通路抑制剂)使其终浓度为100nmol/m1。以上各组细胞,均于48h后收集处理,用倒置显微镜观察细胞形态变化;用RT-PCR的方法检测细胞E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Notch1、Hes1 m RNA表达的水平,用Western blot的方法检测E-钙黏蛋白、α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表达水平。结果1、倒置显微镜下观察细胞形态变化正常对照组细胞A549呈现鹅卵石样紧密排列生长;经过b-FGF处理48h后的A549细胞呈梭形、纺锤形,细胞出现伪足,细胞排列较对照组松散,出现明显形态学改变;加入Notch信号通路抑制剂DAPT组(C组及D组)的细胞形态与正常对照组比较,细胞形态无明显改变。2、RT-PCR结果与A组比较,B组α-SMA、Notch1、Hes1 m RNA表达增高,而E-钙黏蛋白m RNA表达降低,差异有统计学意义(P0.05);与B组比较,C组与D组α-SMA、Notch1、Hes1 m RNA表达下降,而E-钙黏蛋白m RNA表达较高,差异有统计学意义(P0.05)。3、Western blotting结果与A组比较,B组α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表达较高,而E-钙黏蛋白表达降低,差异有统计学意义(P0.05);与B组比较,C组与D组α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表达下降,而E-钙黏蛋白表达较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论1、b-FGF通过下调E-钙黏蛋白的表达,上调α-SMA的表达,诱导上皮间质转化的发生。2、b-FGF诱导上皮间质转化的机制可能与激活notch信号通路有关。
【关键词】：b-FGF 上皮间质转化 Notch信号通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要英文缩略词9-13
• 第一章 前言13-17
• 1.1 肺纤维化13-14
• 1.2 碱性成纤维细胞生长因子与纤维化14
• 1.3 Notch信号通路与纤维化14
• 1.4 碱性成纤维细胞生长因子与Notch信号通路14-17
• 第二章 材料与方法17-27
• 2.1 实验材料17-19
• 2.2 实验方法19-27
• 第三章 实验结果27-33
• 3.1 细胞形态观察27
• 3.2 E-钙黏蛋白、α-SMA mRNA及蛋白的表达结果27-30
• 3.3 Notch1、Hes1 mRNA及蛋白的表达结果30-33
• 第四章 讨论33-39
• 4.1 Notch信号通路与上皮间质转化34-35
• 4.2 碱性成纤维细胞生长因子对Notch1、Hes1表达的影响35-36
• 4.3 碱性成纤维细胞生长因子对E-钙黏蛋白、α-SMA表达的影响36-39
• 第五章结论39-41
• 参考文献41-45
• 文献综述45-55
• 参考文献51-55
• 硕士期间发表的论文55-57
• 致谢57

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本文编号：433299