Bruton酪氨酸激酶对高氧诱导小鼠肺损伤作用机制的研究

发布时间：2017-08-19 12:41

  本文关键词：Bruton酪氨酸激酶对高氧诱导小鼠肺损伤作用机制的研究

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【摘要】：目的:1.建立小鼠高氧肺损伤模型,了解Btk在高氧肺损伤中的表达及活化情况,以期探索肺损伤严重程度与Btk的关系;2.探讨Btk与Nf-kβ信号通路在高氧诱导小鼠肺部炎症反应中的相互作用,以及在细胞凋亡中的调控角色,进一步探索Btk在高氧损伤发病过程中所参与的分子机制;3.进一步研究Btk与炎症细胞因子的关系,探索该信号通路的上下游的调控方向,以及了解氧化应激下的病理机制作用。方法:第一部分:Btk在不同时间段高氧肺损伤表达变化的研究选取健康昆明小鼠60只,随机分为对照组和高氧暴露组(H组),其中高氧暴露组分别按1、2、3、7天时间点分四个亚组,每组12只。对照组给予常规呼吸室内空气;高氧暴露组动物置于自制氧气舱,维持氧浓度在95%以上。造模完成后通过肉眼观察肺组织外观,HE染色镜下观察肺组织病理学改变,测定肺组织W/D比值和BALF中TP含量综合评估各组小鼠肺组织损伤程度,并通过Western blot半定量法测定各时间段小鼠肺组织中Btk、p-Btk的表达水平。第二部分:Btk与NF-кB在高氧肺损伤分子机制中的作用研究在第一部分实验基础上,将实验动物分为四组:对照组、高氧暴露3天组(H3d组)、抑制剂组和高氧暴露3天+抑制剂组(H3d+I组)。对照组的小鼠呼吸正常空气;H3d组置于氧气舱内吸入高浓度氧,氧浓度维持在95%左右;抑制剂组给予腹腔注射Btk特异性抑制剂LFM-A13(50mg/kg),每12h重复给药一次;H3d+I组同时给予上述两种干预措施。造模完成后通过测定各组W/D比值、BALF中TP值和HE染色评估各组模型肺损伤严重程度,通过Western blot半定量各组小鼠肺组织中Btk、p-Btk、p-NF-кBp65和14-3-3蛋白的表达水平。采用RT-qPCR相对定量TNF-a、IL-6的mRNA水平,应用酶联免疫吸附试验检测血清中MCP-1的表达。结果:第一部分:通过肉眼和镜下形态学观察、肺组织W/D比值和BALF中TP含量测定结果显示,H7d组肺组织损伤最为显著。Western blot法测定结果显示,各组小鼠肺组织中Btk、p-Btk的表达量随高氧暴露时间的延长逐渐增高,且差异均具有统计学意义(均p0.05);H7d组与H3d组之间比较,肺组织Btk、p-Btk表达量差异无统计学意义(p0.05)。第二部分:采用Western blot、RT-qPCR及酶联免疫吸附试验检测结果显示,H3d+I组肺组织W/D比值、BALF中TP含量和病理损伤评分明显低于H3d组(p0.05);H3d组肺组织中Btk、p-Btk和p-NF-кBp65表达量均明显高于H3d+I组、对照组和抑制剂组(均p0.05);H3d组肺组织14-3-3蛋白表达量均明显低于H3d+I组、对照组和抑制剂组(均p0.05);而TNF-a和L-6的表达量均明显高于H3d+I组、对照组和抑制剂组(均p0.05);H3d+I组血清中MCP-1含量虽高于对照组,但明显低于H3d组(p0.05)。结论:第一部分:随着高氧暴露时间的延长,肺组织病理损伤程度逐渐加重,同时肺组织Btk及p-Btk表达量逐渐增高,其表达量在高氧暴露3天左右达到峰值,提示Btk在高氧所致肺损伤发病初期具有一定作用。第二部分:通过抑制肺组织Btk表达量可有效减轻肺损伤的严重程度,这种效应可能与上调肺组织14-3-3蛋白表达,下调NF-кB和多种炎症因子表达和活化有关。推测,Btk在氧化应激状态下一方面通过调控NF-кB而促进炎症因子TNF-a、IL-6和趋化因子MCP-1的释放和活化,另一方面通过抑制14-3-3蛋白表达促进肺组织细胞凋亡,最终导致肺组织损伤。
【关键词】：高浓度氧 肺损伤 Bruton酪氨酸激酶 核因子-кB 14-3-3蛋白
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用缩写词中英文对照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 Btk在不同时间段高氧肺损伤表达变化的研究14-26
• 1 材料与方法14-20
• 1.1 材料14-15
• 1.2 方法15-19
• 1.3 数据统计19-20
• 2 结果20-23
• 2.1 小鼠行为学改变20
• 2.2 肺组织病理学改变20-21
• 2.3 各组湿干重比值与 BALF 中总蛋白含量测定21
• 2.4 肺组织Btk及p-Btk半定量测定结果21-23
• 3 讨论23-25
• 4 结论25-26
• 第二部分 Btk在高氧肺损伤分子机制中的作用研究26-40
• 1 材料与方法27-32
• 1.1 材料27-28
• 1.2 方法28-31
• 1.3 统计学分析31-32
• 2 结果32-37
• 2.1 肺组织病理学改变32
• 2.2 各组肺组织湿干重比值和 BALF 中 TP 含量32-33
• 2.3 肺组织Btk、p-Btk、pNF-кBp65和 1433 蛋白表达水平33-35
• 2.4 肺组织TNF-a和IL-6 mRNA的表达变化35-36
• 2.5 各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中MCP-1 的表达量36-37
• 3 讨论37-39
• 4 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-48
• 参考文献46-48
• 致谢48-49
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果49-50
• 个人简介50

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6 郑潇s，

本文编号：700785