STAT6信号通路在Der p2的T细胞表位融合肽特异性免疫治疗中的机制探讨

发布时间：2017-08-26 11:00

  本文关键词：STAT6信号通路在Der p2的T细胞表位融合肽特异性免疫治疗中的机制探讨

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【摘要】：目的:构建编码Der p2 T细胞表位融合基因的原核表达载体p ET-28a(+)-Der p2 T并大规模表达纯化,探讨以嵌合变应原Der p2 T细胞表位融合肽为疫苗对过敏性哮喘进行特异性免疫治疗的效果以及对STAT6的影响。方法:1、合成Der p 2的4个T细胞表位基因T1(11-35AA)、T2(36-50AA)、T3(78-104AA)、T4(105-129AA)的基因片段,用分子生物学方法以T1-T2-T3-T4串联其核苷酸序列合成表位嵌合基因,命名为Der p2 T。将上述融合基因克隆到p ET28a(+)中,构建p ET-28a(+)-Der p2 T重组载体,用限制性内切酶验证;2、将p ET28a(+)-Der p2 T重组载体转入E.coli BL21(DE3)中,IPTG小剂量诱导表达Der p2 T,在最适IPTG浓度条件下进行Der p2 T的大剂量表达并纯化;3、以屋尘螨粗提液为致敏原,构建小鼠过敏性哮喘模型,以纯化的Der p 2 T细胞表位融合肽为疫苗对哮喘小鼠模型进行特异性免疫治疗。利用ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13的水平以及血清中Ig E、Ig G2a抗体水平。制备肺组织病理切片,观察病理变化。Western-blotting检测哮喘小鼠模型肺组织全蛋白提取液所含STAT6的变化。结果:1、成功构建了原核表达重组载体p ET-28a(+)-Der p2 T;2、成功诱导表达并纯化Der p2 T细胞表位融合肽;3、免疫治疗效果:与哮喘组相比,免疫治疗组BALF中IFN-γ含量高于哮喘组(P0.05),IL-4、IL-13水平均低于哮喘组(P0.05);免疫治疗组中血清抗原特异性Ig E抗体明显低于哮喘组(P0.01),而Ig G2a抗体水平显著升高(P0.01)。肺组织病理切片结果显示:经Der p2 T细胞表位融合肽治疗组小鼠过敏反应炎症明显较哮喘组减轻,具体表现为炎性细胞浸润减轻。Western-blotting检测哮喘小鼠模型肺组织全蛋白提取液中STAT6的变化情况为:哮喘组磷酸化STAT6以及非磷酸化STAT6较PBS对照明显升高(P0.05);而经Der p2 T细胞表位融合肽治疗组磷酸化STAT6以及非磷酸化STAT6较哮喘组明显减少(P0.05)。对上述结果分析,Der p2 T细胞表位融合肽对粉尘螨哮喘具有良好的治疗效果,并通过调节STAT6的变化而达到治疗目的。结论:Der p2 T细胞表位融合肽具有良好的治疗效果,且通过调节STAT6的变化而达到治疗目的。
【关键词】：屋尘螨 Der p2T细胞表位融合肽 特异性免疫治疗 STAT6
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 前言13-15
• 第一部分 屋尘螨Ⅱ类变应原Der p2 T细胞表位融合基因的克隆和原核表达15-36
• 1 研究目的15
• 2 材料与方法15-30
• 2.1 材料15-22
• 2.2 方法22-30
• 3 结果30-34
• 3.1 合成基因的PCR结果和双酶切鉴定30-31
• 3.2 重组蛋白Der p2T的SDS-PAGE分析31-32
• 3.3 纯化的Der p2T细胞表位融合肽的SDS-PAGE分析32-33
• 3.4 纯化的Der p2 T的Western blotting鉴定33-34
• 3.5 对比Der p 2、Der p2 T分别与粉尘螨过敏患者血清IgE结合的能力34
• 4 讨论34-36
• 第二部分 Der p2 T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果和STAT6信号通路的影响36-49
• 1 研究目的36
• 2 材料与方法36-42
• 2.1 材料36-39
• 2.1.1 动物36-37
• 2.1.2 实验原材料37
• 2.1.3 主要试剂37
• 2.1.4 主要仪器设备37-38
• 2.1.5 试剂的配制38-39
• 2.2 方法39-42
• 3 结果42-46
• 3.1 各组小鼠症状和体征的改变42
• 3.2 Der p2T细胞表位融合肽抑制了嗜酸性粒细胞浸润42-43
• 3.3 BALF中细胞因子IL-4、IL-13、和IFN-γ 的变化43-44
• 3.4 血清变应原特异性IgE、IgG2a的水平变化44
• 3.5 肺组织病理结果44-45
• 3.6 肺组织病中STAT6蛋白表达分析45-46
• 4 讨论46-49
• 结论49-50
• 创新点50-51
• 参考文献51-58
• 综述 尘螨的致敏及其防治58-68
• 参考文献63-68
• 作者简介及读研期间主要科研成果68-69
• 致谢69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：741170