FOXO1真核表达载体构建及其对TNF-α介导的A549细胞凋亡的影响

发布时间：2017-09-06 00:21

  本文关键词：FOXO1真核表达载体构建及其对TNF-α介导的A549细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的构建FOXO1真核表达质粒,明确FOXO1对TNF-α介导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响及其可能存在的调控机制。方法根据Gen Bank中人FOXO1 CDS序列设计并合成引物,提取A549细胞总RNA,通过RT-PCR获得FOXO1目的基因片段;通过酶切、连接,构建GV230-FOXO1真核表达质粒并进行测序分析鉴定;经鉴定后的表达载体瞬时转染入A549细胞,荧光显微镜及Western blot法检验FOXO1蛋白表达。体外培养A549细胞,利用脂质体Lipofectamine~(TM) 2000将本次合成的GV230-FOXO1质粒转染入A549细胞,给予10 ng/ml TNF-α刺激24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bim的表达。结果成功构建GV230-FOXO1荧光真核表达质粒;FOXO1组细胞凋亡率明显高于TNF-α组和阴性对照组(P0.05),FOXO1组蛋白Bim的表达明显高于TNF-α组和阴性对照组(P0.05)。结论 FOXO1在TNF-α介导的A549细胞损伤中起促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能为通过上调促凋亡蛋白Bim的表达,从而促进细胞凋亡。
【作者单位】： 南方医科大学研究生院;广州军区广州总医院呼吸内科;
【关键词】： FOXO 真核表达质粒 TNF-α Apoptosis Bim
【基金】：国家自然科学基金(81200002,81370173)
【分类号】：R563
【正文快照】： FOXO是FOX家族的1个亚群,包括FOXO1、FOXO3、FOXO4和FOXO6等,可受磷酸化、乙酰化和泛素化调节,不同亚族的调节方式有所不同,其中磷酸化是最主要的调节方式[1-2]。他们在哺乳动物细胞的凋亡、应激、细胞周期阻滞、DNA损伤/修复以及糖代谢调节中起着重要作用。其中FOXO1作为体内

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1 李瀚e，

本文编号：801073