抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定

发布时间：2017-10-11 14:05

  本文关键词：抗CML单链免疫毒素载体的构建、表达及活性鉴定

  更多相关文章： 慢性粒细胞白血病 重组免疫毒素 克隆 原核表达 凋亡

【摘要】：目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力。结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFvETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡。结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡。
【作者单位】： 重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室 临床检验诊断学教育部重点实验室;重庆医科大学;
【关键词】： 慢性粒细胞白血病 重组免疫毒素 克隆 原核表达 凋亡
【基金】：国家自然科学基金(No.30871102) 重庆医科大学优秀博士论文基金(2009年)资助项目
【分类号】：R392
【正文快照】： 慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leuke-mia,CML)是由伴有获得性染色体异常的多能干细胞水平上的恶性病变而引起的,目前耐药和复发仍然是CML的两大难题[1-3]。近年来,随着基因重组技术产生和发展,基因重组免疫毒素已成为肿瘤治疗研究中的重点和热点,并获得了迅猛的发展

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 安鸿志;林晓贞;房佰俊;;酪氨酸激酶抑制剂初始治疗慢性粒细胞白血病的研究进展[J];中国药房;2011年33期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 朱小影;王东;李身锋;张利军;钟梁;冯文莉;;抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体的原核表达及其活性[J];中国生物制品学杂志;2012年07期

2 王灵杰;胡雅芳;汪凤梅;;多靶点酪氨酸激酶抑制剂的研究进展[J];中国药房;2013年13期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张丽芳;傅玉才;许铭炎;许锦阶;;阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达[J];热带医学杂志;2006年12期

2 张景芝;张西臣;李建华;尹继刚;宫鹏涛;;旋毛虫Ts43基因的克隆与原核表达[J];中国病原生物学杂志;2007年01期

3 彭礼飞;胡晶晶;邓莉;杨陈;甘伟琼;吴亚敏;付汉维;;十二指肠钩虫脂肪酸与视黄醇结合蛋白(Ad-FAR-1)基因的克隆及原核表达[J];热带医学杂志;2007年08期

4 史跃杰;李慧;;人NT-proBNP的克隆及原核表达[J];放射免疫学杂志;2006年03期

5 周艳;胡建华;高诚;王宗耀;;小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析[J];中国实验动物学报;2008年04期

6 杨玉成;王垎琴;钱迪;何芸;黄江菊;洪苏玲;;EB病毒LMP1C端原核表达质粒的构建[J];第三军医大学学报;2007年01期

7 朱卫华;李生迪;宣俊文;陈翠萍;;幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因的克隆及其高效表达[J];中国生物制品学杂志;2008年09期

8 方强;骆江坤;崔琢;齐文娟;胡元生;沈继龙;;猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达[J];南方医科大学学报;2010年02期

9 傅蕾,谭德明,彭仕芳,侯周华,李萍;人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因的克隆及原核表达[J];中国医师杂志;2005年07期

10 张巧玉;梁志清;李玉艳;李晋涛;史常旭;;小鼠精子蛋白Sp17的克隆、表达及其免疫原性研究[J];第三军医大学学报;2008年24期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王永久;由振东;崔瑞耀;路长林;何成;;大鼠脑中催产素受体cDNA的克隆和在大肠杆菌与CHO细胞内的表达[A];全面建设小康社会：中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集（下）[C];2003年

2 袁菊;成军;洪源;陶明亮;李康;石磊;靳亚平;;HCV反式调节基因p7TP2原核表达载体的构建及融合蛋白表达[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年

3 宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体原核表达载体的构建表达及活性鉴定[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

4 宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体原核表达载体的构建表达及活性鉴定[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

5 王平;杨秀利;徐薇;储以微;熊思东;;新分子ITIP的原核表达、纯化及抗体制备[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

6 陈婧;袁志强;彭毅志;;高迁移率族蛋白cDNA的克隆与表达[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

7 鲍德明;胡乃中;沈际佳;石海;许建明;;人巨噬细胞金属弹力酶催化域基因原核表达载体的构建与鉴定[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

8 陈婧;袁志强;彭毅志;;高迁移率族蛋白cDNA的克隆与表达[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年

9 陈曦;张宗德;刘忠泉;贾红彦;邢爱英;古书香;;结核分枝杆菌rv3873、rv3879c基因原核表达载体的构建和表达[A];中华医学会结核病学分会2006年学术会议论文汇编[C];2006年

10 李冬野;侯喜林;朴范泽;;金黄色葡萄球菌β-溶血毒素基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 谭浩 董学清;我国异基因干细胞移植技术获重大突破[N];中国医药报;2000年

2 ;As_(2)S_(2)与STI571协同诱导K562细胞凋亡[N];中国医药报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 喻刚;重组四价A群链球菌疫苗的基因克隆、表达纯化和免疫原性的初步研究[D];武汉生物制品研究所;2009年

2 金海龙;重组免疫毒素CTLA4-ScFv-Mel的构建、制备及活性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年

3 芦兴武;人B淋巴细胞活化相关基因的克隆及其功能初探[D];中国协和医科大学;2001年

4 康巧珍;幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白基因克隆表达及免疫评价[D];郑州大学;2005年

5 曾令宇;活化T细胞选择性清除分子hS83-P34的构建、制备及功能研究[D];四川大学;2005年

6 李虹;IL-18－PE38重组免疫毒素及其治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的研究[D];四川大学;2004年

7 宁铂涛;鼠抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体的研究[D];浙江大学;2005年

8 田玉;中国不同疫区L.d.ITS序列分析及L.p.PAL、HSP60基因克隆和真核表达[D];四川大学;2005年

9 章金涛;豫医无毛小鼠的生物学特征及其分子遗传学研究[D];浙江大学;2005年

10 瞿祥虎;人源重要功能新基因的克隆、表征与功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2001年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 黄家芳;日本血吸虫Dna J-类似蛋白基因原核、真核表达载体的构建及其对小鼠的保护性免疫作用研究[D];南华大学;2005年

2 牛凌云;肝螺杆菌甲基基团接受趋化信号转导蛋白的克隆表达纯化及血清学应用[D];南方医科大学;2009年

3 李婉南;人SHP-1催化结构域的克隆表达及其多克隆抗体的制备[D];吉林大学;2005年

4 姚炜;结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp60编码基因的克隆与原核表达[D];华中科技大学;2006年

5 刘伟;bcr-abl融合基因片段和鼠IL-7双表达基因疫苗的免疫保护机制研究[D];扬州大学;2005年

6 汪猜;人巨细胞病毒（HCMV）pp65基因的克隆、原核表达及抗原性研究[D];湖南农业大学;2005年

7 代芳;人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2基因克隆及其稳定表达株的鉴定[D];安徽医科大学;2005年

8 汪雪峰;球形幽门螺杆菌vacA、cagA基因克隆及序列分析[D];安徽理工大学;2005年

9 赵雷;人高迁移率族蛋白1的克隆、表达及其功能研究[D];第一军医大学;2005年

10 罗琳;抗CD3人鼠嵌合抗体的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];吉林大学;2006年

，

本文编号：1012918