周期型马来丝虫复合基因真核表达体系的建立

发布时间：2017-10-11 14:15

  本文关键词：周期型马来丝虫复合基因真核表达体系的建立

  更多相关文章： 周期型马来丝虫 -磷酸甘油醛脱氢酶 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 复合基因 重组蛋白

【摘要】：目的将含周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)复合基因的重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH转染人宫颈癌细胞(Hela)细胞获得复合重组质粒稳定转染细胞株,并纯化所表达的重组蛋白,为研制新型的抗周期型马来丝虫重组蛋白疫苗提供理论及实验依据。方法将成功构建的pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH和空载体pcDNA3.1(+)分别转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞,进而通过RT-PCR和SDS-PAGE鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。对阳性克隆进行无血清悬浮培养,收集细胞及其培养液。亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过Western-blotting对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH经转染Hela细胞,G418持续筛选14 d获得稳定表达。表达产物经Western-blotting法鉴定能够与相应的免疫鼠血清反应,相对分子质量Mr约为54×103。结论成功建立了周期型马来丝虫复合重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH稳定转染细胞株并获得了相应的重组蛋白。
【作者单位】： 南通大学医学院病原生物学教研室;
【关键词】： 周期型马来丝虫 -磷酸甘油醛脱氢酶 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 复合基因 重组蛋白
【基金】：江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目(2012JSSPITP1571) 南通市应用研究计划(BK2012017)
【分类号】：R382
【正文快照】： 丝虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫病,世界上在超过100个国家和地区流行,11亿人口受到感染的威胁,其中慢性丝虫病患者4 000万[1,2],在我国目前已基本消除丝虫病,但由于全球气候变暖,传播媒介广泛存在,加之大量外来流动人口的涌入,尤其是沿海经济发达地区,外来务工者中较多

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 黄为群;方政;陈阳;姜声扬;吴建军;谢东方;;周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析[J];现代预防医学;2007年13期

2 张赛楠;方政;童海燕;方浩;谢东方;黄为群;徐邦生;;周期型马来丝虫GAPDH部分编码基因原核及真核表达载体的构建[J];现代预防医学;2010年22期

3 傅斌,李桂玲,胡颖新,曹新春,孙传红,李怀菊;输入性传染源对山东省消除丝虫病影响的调查[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2003年02期

4 张贤昌;黄少玉;邓卓晖;欧作炎;伍卫平;骆雄才;陈锡欣;张启明;林荣幸;阮彩文;王金龙;崔惠儿;;广东省输入性丝虫病病例调查[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2008年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 李锦辉;;浅谈广西消除疟疾病例侦查和病灶处置措施[J];应用预防医学;2011年01期

2 季洪健;王辉;;丝虫病胸腔积液的诊断与治疗[J];临床肺科杂志;2013年01期

3 张赛楠;方政;童海燕;方浩;谢东方;黄为群;徐邦生;;周期型马来丝虫GAPDH部分编码基因原核及真核表达载体的构建[J];现代预防医学;2010年22期

4 王继学,陈凤义,赵永胜,李小娟,崔淑明,申锦玉,郑莉莉;大连市首例外源性丝虫病个案分析[J];中国微生态学杂志;2005年01期

5 张赛楠;方政;陆施娟;王慧;徐邦生;;周期型马来丝虫CPI基因真核表达载体的构建和免疫学研究[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2011年06期

6 吴巨龙;王绚;吕刚;苏娟;逯召莲;孙萃萍;景涛;;细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测[J];中国人兽共患病学报;2014年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 林琳;应用微卫星DNA标志研究我国雷氏按蚊群体遗传结构[D];第二军医大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 黄少玉,陈佩玑,潘波,欧作炎,邓卓晖,刘美珍,刘勇鹰,张启明;广东省基本消灭丝虫病后肃清残存传染源的措施和效果分析[J];广东卫生防疫;1999年04期

2 宋海红,徐红梅;上海市南汇区流动人口血吸虫病、疟疾、丝虫病监测10年分析[J];疾病监测;2005年02期

3 朱素贞;钟永良;刘美涛;饶隽;;周期型马来丝虫基因组文库构建中某些实验方法的比较[J];实用寄生虫病杂志;1993年04期

4 黄为群;方政;陈阳;姜声扬;吴建军;谢东方;;周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析[J];现代预防医学;2007年13期

5 仲崇祜;盛琦;许金范;杨宝金;李文备;房继诰;孙中孚;丁立庆;曹彦文;杜宗寺;刘庆顺;陈超;;山东省丝虫病基本消灭后流行病学动态调查研究[J];中国寄生虫病防治杂志;1989年01期

6 黄少玉,骆雄才,欧作炎,潘波,崔惠儿,张启明;广东省丝虫病的流行与防治[J];中国寄生虫病防治杂志;2004年06期

7 张选明,白礼益,张富南,温成麟,王明盛,卢素惠,钱晓红,吴芳,王文超;四川乐山地区雷氏按蚊嗜人亚种传播马来丝虫病的媒介能量调查[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1987年03期

8 史宗俊,袁以真,孙家振,李中兴,郑学修,李国培,陈贺先,赵庆法,丁善根,施恒华,罗幸福,石福田,黄倩,蔺西萌,姚润林,王学成;丝虫病防治后期低密度微丝蚴血症者传播作用的研究[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1988年02期

9 史宗俊,孙德建,王兆俊,陶增厚,潘士贤,刘心机,张绍清,欧作炎,朱素贞,李庆俊,常江,吴让庄,邓珊珊,郑贤球;中国阻断淋巴丝虫病传播的策略和技术措施的研究成果简介[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2001年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;周期型马来丝虫皮下注射接种长爪沙鼠的实验观察[J];遵义医学院学报;1976年01期

2 ;周期型马来丝虫皮下注射接种长爪沙鼠的继续观察[J];遵义医学院学报;1978年01期

3 郑惠君;程文芳;陶增厚;方仁丽;;周期型马来丝虫—长爪沙鼠模型实验技术的改进[J];贵州医药;1982年03期

4 万启惠;黄蕙芳;;周期型马来丝虫感染期幼虫在人卵巢癌细胞中的体外培养(科研简报)[J];贵州医药;1988年01期

5 朱良;;海群生对班氏和马来丝虫微丝蚴的白天诱出作用[J];国际医学寄生虫病杂志;1976年04期

6 晋雪香;屈孟卿;尹清源;毛福荣;;周期型马来丝虫实验感染长爪沙鼠技术方法的改进[J];郑州大学学报(医学版);1982年03期

7 ;中华按蚊人工感染周期型马来丝虫的实验观察[J];遵义医学院学报;1976年01期

8 马云祥;董晋豫;马新爱;郑学修;;长爪沙鼠人工感染周期型马来丝虫实验报告[J];河南预防医学杂志;1981年02期

9 仇锦波;用种特异的DNA探针鉴别蚊媒体内的马来丝虫[J];国际医学寄生虫病杂志;1987年03期

10 王冠群,刘景元,刘心机,陈樾楠,屠昭平,翁少鹏;马来丝虫在不同宿主间相互感染的实验观察[J];中国人兽共患病杂志;1988年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 方政;谢东方;黄为群;沈勤;童海燕;徐邦生;;周期型马来丝虫肌球蛋白部分编码基因Bm-M55的克隆与真核表达[A];第十届中国科协年会论文集（三）[C];2008年

2 付宝权;吴秀萍;刘明远;张亚兰;原丽红;李莲瑞;卢强;陈启军;P.Boireau;;旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

3 陈海峰;陈观今;郑焕钦;郭虹;吕芳丽;;阳离子脂质体介导的弓形虫SAG1/ROP1复合基因的DNA免疫[A];中国动物学会第八次全国寄生虫学学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年

4 刘杰;王海燕;刘新;王文亭;刘娟;李宁;刘芙君;靳韶华;李建远;;人类附睾表达精子结合蛋白HEL-38的生物学研究[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年

5 李彬先;张建实;;3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)诊断试剂盒的研制及对心硬病人诊断价值的研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

6 张洁;何深一;薛明福;崔玉玲;;小鼠白介素-12对弓形虫复合基因疫苗SAG1-ROP2免疫增强作用的研究[A];中华医学会热带病与寄生虫学分会机会性感染学术研讨会论文汇编[C];2007年

7 黄良夫;毕大卫;;性激素一原发性骨质疏松症一治疗进展[A];浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十一次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2005年

8 张明方;于天祥;毛碧增;何祖华;;西瓜转葡聚糖酶及几丁质酶复合基因研究[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年

9 杨跃进;陈跃峰;阮英茆;陈曦;孙瑞成;王清峙;张连庄;田毅;周燕文;陈纪林;高润霖;陈在嘉;;卡维地洛对大鼠急性心肌梗死后心肌细胞凋亡和bcl-2/bax基因表达的作用[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

10 陈跃峰;杨跃进;陈曦;阮英茆;张宝杰;王清峙;张连庄;田毅;周燕文;陈纪林;高润霖;陈在嘉;;大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡和调亡相关基因的表达[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前5条

1 ;全球对抗SARS[N];中华工商时报;2003年

2 记者 颜亮 毛磊;非典科研热，引发专利抢夺战[N];新华每日电讯;2003年

3 记者 牛泽刚;“863”计划项目课题在延吉启动[N];延边日报;2009年

4 记者 孙娜;我市企业对接海外研发机构[N];徐州日报;2008年

5 本报记者 黄朝武;全球第二轮生物技术发展浪潮已经开始[N];农民日报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 贾立军;牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的研究[D];延边大学;2012年

2 樊丽超;克—雅氏病脑脊液Cystatin C、IL-4的检测、免疫组织化学及基因的研究[D];吉林大学;2007年

3 聂华丽;尼龙亲和膜的制备及其在木瓜蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶抑制剂纯化中的应用研究[D];东华大学;2007年

4 张育才;海马CA1区神经元缺氧去极化的机制及半胱氨酸蛋白酶抑制剂对缺氧神经元保护作用的研究[D];中国医科大学;2004年

5 苏帕汉尼（SUBHANI，，F）;恶性疟原虫保护性抗原复合基因与人白细胞介素-2基因的重组、表达及其表达产物的鉴定[D];中山医科大学;1996年

6 朱国志;大鼠血糖调节相关基因的克隆和功能研究[D];中国协和医科大学;2000年

7 姚朗;恶性疟原虫保护性抗原复合基因DNA疫苗的构建及免疫学特征研究[D];第一军医大学;2000年

8 陈海峰;阳离子脂质体介导的弓形虫SAG1/ROP1复合基因的DNA免疫[D];中山医科大学;2001年

9 丛华;弓形虫多价和多表位核酸疫苗黏膜免疫的实验研究[D];山东大学;2006年

10 陈栋;MMP-2，MMP-9和TIMP-2启动子区基因多态性与侵袭性牙周炎相关性的研究[D];第四军医大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 齐文娟;囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价[D];蚌埠医学院;2011年

2 刘亚斌;半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与冠心病的关系[D];大连医科大学;2009年

3 李天艺;糖尿病微血管病变经葛根素治疗前后3-磷酸甘油醛脱氢酶活性变化[D];郑州大学;2007年

4 杨婷婷;弓形虫P30单基因疫苗与P30-ROP2复合基因疫苗免疫小鼠的实验研究[D];山东大学;2005年

5 赵红;弓形虫SAG1-ROP2复合基因疫苗与免疫佐剂大肠埃希菌肠毒素B亚基对小鼠的免疫保护性研究[D];山东大学;2010年

6 江乐;人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素复合基因的克隆和表达[D];曲阜师范大学;2010年

7 刘彪;重组人BMP-4/7复合基因腺病毒转染SD大鼠BMSCs并诱导其向类髓核细胞分化的实验研究[D];重庆医科大学;2012年

8 李首庆;弓形虫SAG1、GRA2单基因疫苗及SAG1-GRA2复合基因疫苗的免疫效果研究[D];山东大学;2007年

9 黄丹翊;鱼藤酮在帕金森病大鼠发病机制中的作用[D];华中科技大学;2006年

10 姚远;弓形虫SAG1-MIC8复合基因疫苗对小鼠的免疫保护性研究[D];山东大学;2009年

本文编号：1012968