Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分离心肌细胞的效果比较及分析

发布时间：2017-10-12 03:15

  本文关键词：Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分离心肌细胞的效果比较及分析

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【摘要】：目的比较Ⅰ型和Ⅱ胶原酶对大鼠心肌细胞分离的分离效果,并对其成因进行分析。方法利用Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,比较两种酶对心肌细胞的分离效果;采用免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting技术检测成年大鼠心肌组织中是否存在Ⅱ型胶原;用大鼠剑突软骨部组织的Ⅱ型胶原和心肌组织的Ⅲ型胶原作为阳性对照;用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测Ⅱ型胶原酶试剂的成分。结果Ⅰ、Ⅱ型胶原酶分别消化心肌组织,所获心肌细胞数量分别为(5.66±0.83)×106和(5.61±1.01)×106,心肌细胞存活率分别为(74.17±6.27)%及(75.50±9.07)%,两者差异无显著性。分离的心肌细胞大部分不搏动,极少数细胞保持自律性收缩;Ⅱ型胶原在成年大鼠心肌组织中呈阴性表达,在剑突的软骨组织中呈阳性表达,Ⅲ型胶原在心肌组织中呈阳性表达;Western blotting检测显示,心肌组织中并无Ⅱ型胶原表达;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,Ⅱ型胶原酶试剂是一种包括5种蛋白的混合物。结论成年大鼠心肌组织中无Ⅱ型胶原,用Ⅱ型胶原酶分离大鼠心肌细胞不具有针对性。
【作者单位】： 新乡医学院 河南省医用组织再生重点实验室;新乡医学院第三附属医院肿瘤科;
【关键词】： Ⅱ型胶原酶 Ⅱ型胶原 心肌 免疫组织化学 免疫荧光 大鼠
【基金】：河南省21世纪优秀人才支持计划资助项目(2005HANCET215) 河南省重点攻关资助项目(072102310012)
【分类号】：R329
【正文快照】： 心肌细胞外基质是心肌组织的重要组成部分,它们对心肌细胞的生长、分化等发挥重要作用[1]。心肌细胞外基质的主要成分包括:结构蛋白(胶原蛋白、弹性蛋白等)、黏连蛋白(层黏连蛋白、纤黏连蛋白等)、蛋白聚糖等[2~5]。其中,胶原是细胞外基质中含量最丰富的成分,在成年动物心脏中

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本文编号：1016329