Rab39A多克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-10-13 20:11

  本文关键词：Rab39A多克隆抗体的制备与鉴定

  更多相关文章： RabA 原核表达 多克隆抗体

【摘要】：制备抗人Rab39A多克隆抗体并进行纯化检测,以用于Rab39A功能的研究.选取免疫原性强且特异性高的羧基端42个氨基酸(176～217aa)作为目的片段.PCR法扩增并构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rab39C42.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化GST-Rab39C42融合蛋白,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体.然后以亲和层析法纯化抗体,利用Western blot和免疫荧光检测抗体的特异性.结果表明,构建的原核表达载体经IPTG诱导后高效表达GST-Rab39C42蛋白,纯化后抗体质量浓度为1μg/μL;Western blot实验显示,抗体可以识别外源Rab39A蛋白和多个细胞系的内源Rab39A蛋白;抗体中和实验和RNA干扰实验证明了该抗体具有特异性.本研究成功构建了pGEX-4T-1-Rab39C42原核表达载体,并制备了特异性的抗人Rab39A兔多克隆抗体,为进一步研究Rab39A的功能提供了有力的支持.
【作者单位】： 厦门大学药学院;
【关键词】： RabA 原核表达 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(30971442,31071176) 福建省自然科学基金项目(2010J01234)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 小分子GTP酶Rab蛋白属于Ras超家族.在哺乳动物细胞中,发现Rab家族的成员超过70个,它们定位于细胞内不同的细胞器中,是调控蛋白质跨膜运输的关键因子[1].目前仍有超过半数Rab蛋白的性质与细胞生物学功能还不清楚,特异性Rab蛋白抗体对于Rab蛋白功能的研究具有重要意义.由于Rab

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴晓e，

本文编号：1026824