IL-17R-FcγRⅡb基因体外诱导树突状细胞表达及其对淋巴细胞增殖活化的影响

发布时间：2017-10-13 20:45

  本文关键词：IL-17R-FcγRⅡb基因体外诱导树突状细胞表达及其对淋巴细胞增殖活化的影响

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【摘要】：目的:构建编码人全长IL-17R与FcγRⅡb双基因表达重组腺病毒载体并对其特性进行鉴定,探讨阻断其信号调节通路对妊娠哮喘发病的影响。方法:将扩增出的拼接基因片段定向克隆于pAdTrack-CMV中经与pAdeasy-1同源重组,鉴定正确的阳性重组子通过脂质体介导转入AD293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光(GFP)信号并采用PCR法对其进行鉴定;纯化腺病毒感染体外细胞因子协同诱导培养的妊娠哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞(DC),利用RT-PCR、Western免疫印迹检测IL-17R和FcγRⅡb表达;流式细胞术、CCK-8、ELISA分析重组腺病毒的修饰对DC表面分子表达,刺激T细胞增殖抑制变化和MLR上清中IFN-γ、IL-4、IL-17分泌水平影响。结果:构建的重组腺病毒载体插入序列完全正确;经GFP表达和PCR检测证实成功包装获得高滴度重组腺病毒;感染DCs的GFP阳性细胞数达到85%;在mRNA及蛋白水平均可同时转录和表达出符合预期的IL-17R和FcγRⅡb。CD11c阳性表达率在各组间无显著差异;与对照细胞及EGFP-DCs相比,经IL-17RFcγRⅡb修饰的DC表面CD80表达增高,而CD86表达减少(P0.05);IL-17R-FcγRⅡb-DCs相同浓度比例刺激T细胞增殖水平均明显受抑(P0.05);转染载体共培养物上清液中Th2/Th17类细胞因子IL-4、IL-17水平下降,Th1类细胞因子IFN-γ升高(P0.05),IFN-γ/IL-4/IL-17相对比值增加(P0.05)。结论:IL-17R-FcγRⅡb融合基因体外阻断CD86/CD28共刺激通路可诱导DC免疫耐受状态,抑制抗原特异性T细胞增殖并影响Th1/Th2/Th17亚群分化,有望在妊娠哮喘免疫耐受缺陷和缓解气道炎症反应中发挥作用。
【作者单位】： 第四军医大学西京医院妇产科;USA
【关键词】： 哮喘 妊娠 免疫球蛋白G 树突状细胞 T细胞 免疫耐受
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81100441)
【分类号】：R392
【正文快照】： 哮喘是由多种免疫活性细胞和细胞因子等共同参与的一种外周免疫耐受机制发生缺陷的气道炎性疾病[1],其确切病因至今尚未明确。近年来,树突状细胞(Dendritic cell,DC)双向免疫调节的独特功能机制认为,气道炎症过程DC诱导T细胞活化起着关键的枢纽作用[2];妊娠期相关性疾病免疫

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 马佳佳;Nick Lu;陈必良;;转录因子RORγt对妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的调节作用[J];解放军医学杂志;2012年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 蔡金玲;杜丽;马琼;潘秀颉;杨晓云;肖凤君;崔玉芳;;创伤合并γ射线照射后大鼠脾脏Treg/Th17平衡的变化及其意义[J];解放军医学杂志;2013年01期

2 陈瑞;张磊;宋少华;邹游;倪之嘉;郭闻渊;;体外上调淋巴细胞HO-1表达对CD4~+CD25~+Treg细胞分化的影响[J];解放军医学杂志;2013年09期

3 喻蓉;于化鹏;;髓源抑制性细胞在非肿瘤疾病中的研究进展[J];解放军医学杂志;2013年10期

4 马佳佳;Nick Lu;陈必良;滑玮;张建芳;;重组IL-12表达载体构建及对妊娠期哮喘小鼠气道炎症的调节与免疫应答影响[J];中国免疫学杂志;2013年03期

5 马萍;闫玉文;邢杰;于剑;;旋毛虫感染对过敏性哮喘小鼠血清及肺泡灌洗液总IgE的影响[J];武警后勤学院学报(医学版);2013年04期

6 褚晓丹;陈萱;;ROR-γt的表达在HBV宫内感染调控机制的研究[J];中国优生与遗传杂志;2013年07期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 龚雨新;于化鹏;邓火金;孙尔维;罗宇维;;Th17细胞在哮喘小鼠发病中的作用机制研究[J];解放军医学杂志;2009年01期

2 马壮;;支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病所致呼吸衰竭的机械通气治疗进展[J];解放军医学杂志;2011年08期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张艳霞;高天e，

本文编号：1027000