温针灸对制动引起的KOA模型兔膝关节软骨MMP-1和IL-1β的影响

发布时间：2017-10-14 13:34

  本文关键词：温针灸对制动引起的KOA模型兔膝关节软骨MMP-1和IL-1β的影响

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【摘要】：温针灸(warming needle moxibustion)是针刺和艾灸结合的一种治疗手段,适用于既需要留针又需要艾灸的病症,具有操作方便,省时省力等优点。对于膝骨关节炎,温针灸有独特的治疗作用,可通过针刺疏通局部气血,并结合艾灸的温热作用疏散寒邪。兔膝骨关节炎制动造模法制备的膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型可有效模拟膝关节在长期负重受压状态下造成的病理改变,与KOA发病中随着年龄增长、膝关节负荷增大等情况造成软骨退行性病变机制相符合。并规避了手术建立KOA模型造成的炎性并发症影响实验指标的情况。膝关节软骨代谢是一个复杂的动态平衡,一旦失衡,就会发展为KOA。其中,破坏性细胞因子是打破平衡的关键,在众多导致KOA的细胞因子中,以白介素1β(IL-1β)为始动环节、以基质金属蛋白酶1(MMP-1)为主导因子,IL-1β可激活基质金属蛋白酶原,而后者通过酶的生物活性作用催化软骨基质的降解,加重KOA表现。本文主要通过三部分来探讨温针灸治疗膝骨关节炎的机制和效果。第一部分是理论研究,综述一主要阐述KOA中西医机制和中西医治疗方法。中医方面：KOA和古代痹证的关系；古代医家对痹证的认识包括病因、病机、证型等；中医方药的治疗,西医方面：膝关节解剖结构；KOA流行病学调查；KOA发生机制学说；KOA的影响因素；西医临床治疗方法。综述二主要是针对针灸理论和针灸疗法和KOA关系的探讨,通过对古代针灸医家的理论研究,结合针灸治疗的现代机理,探讨针灸治疗KOA的机制,并初步探讨了近5年内针灸相关的治疗方法。综述三探讨细胞因子和KOA的关系,并概述关于针灸改变KOA细胞因子表达的实验研究。第二部分为实验操作。第三部分是讨论,主要探讨动物模型选择的理由、对细胞因子指标选择的理由和取穴理念。目的：本课题以膝关节制动法复制的KOA模型兔为研究对象,以温针灸为干预手段,干预后观察膝关节大体形态,以MMP-1和IL-1β为主要指标,探讨温针灸在KOA中降低炎性因子表达的相关机制,以期为临床提供一定实验依据。方法：①选用雄性日本大耳白兔30只,适应性饲养1周后,采用随机数字表法分为正常组、模型组、治疗组,每组各10只。②除正常组外,其余2组兔通过膝关节强迫伸直位制动6周建立膝骨关节炎模型。将兔的右下肢膝关节伸直呈150-180°,踝关节背屈60-90°,并用石膏绷带固定,外缠绕纱布防止磨损,脚趾端露出以便于观察血流是否通畅,防止缺血坏死,共计6周。第7周末日结束造模。③第8周首日,肉眼观察各组兔膝关节大体形态,并比较各组间差别。④正常组兔常规饲养,不做干预；治疗组兔肉眼观察后针刺“内膝眼”、“外膝眼”、“阳陵泉”、“足三里”,并搓艾绒于针柄上点燃,行温针灸,计20min,1日1次共4周；模型组同治疗组一样每天抓取后固定于兔台,但不做温针灸干预。⑤采用Lequesne MG法评分并记录各组兔膝关节肿胀程度、疼痛程度、活动范围和步态。⑥采用HE染色法观察膝关节软骨。⑦采用放射免疫法检测各组兔膝关节软骨组织中IL-1β和MMP-1含量。结果：①膝关节大体形态：正常组兔膝关节无变形,活动度好,兔驱赶时行动正常；模型组及治疗组兔膝关节肿胀明显,备皮后可观察到膝关节软骨变形,兔驱赶时跛行。②膝关节软骨形态：正常组软骨细胞分布均匀,结构清楚,层次清晰；模型组可见排列散乱的软骨细胞,部分细胞呈簇状排列,结构层次不明晰；治疗组可见软骨细胞排列较规则,偶见少量簇集的软骨细胞。③ Lequesne MG评分：治疗后,与正常组相比,模型组、治疗组膝关节肿胀程度、疼痛程度、活动范围和步态四项评分均升高(均为P0.05)；与模型组相比,治疗组膝关节肿胀程度、活动范围评分降低(均为P0.05)。④IL-1 β含量：与正常组相比,模型组、治疗组含量显著升高(分别为P0.01、P0.01)；与模型组相比,治疗组含量显著降低(P0.01)。⑤MMP-1含量：与正常组相比,模型组、治疗组均显著升高,差异有统计学意义(分别为P0.01,P0.01)；与模型组相比,治疗组含量显著降低(P0.01)。结论：①温针灸能降低软骨组织中IL-1 β和MMP-1的含量。②温针灸能改善膝关节软骨细胞簇集现象。③温针灸能降低膝关节肿胀程度,增大膝关节活动范围。④温针灸治疗KOA的作用机制可能与降低软骨组织中IL-1β和MMP-1的含量有关。
【关键词】：膝骨关节炎 基质金属蛋白酶-1 白细胞介素-1β 温针灸 膝关节软骨
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R245;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文缩略词表10-11
• 综述一 中西医对膝骨关节炎的研究探讨11-23
• 1. 中医对膝骨关节炎的研究探讨11-14
• 1.1 简述古代中医对膝骨关节炎的研究探讨11-12
• 1.2 古代医家对膝骨关节炎的中药治疗12-13
• 1.3 现代中医对膝骨关节炎的中药治疗13-14
• 2. 西医对膝骨关节炎的研究探讨14-21
• 2.1 膝关节的结构和生理特点15
• 2.2 膝骨关节炎的流行病学研究15
• 2.3 病因和影响因素15-16
• 2.4 膝骨关节炎的机制研究16-17
• 2.5 临床表现和诊断17-18
• 2.6 现代医学治疗方法18-21
• 参考文献21-23
• 综述二 针灸治疗膝骨关节炎的研究进展23-30
• 1. 针灸治疗KOA机制23-24
• 1.1 针灸治疗KOA机制传统中医理论研究23
• 1.2 针灸治疗KOA机制现代医学理论研究23-24
• 2. 针灸治疗KOA方法24-28
• 2.1 毫针疗法24-25
• 2.2 电针疗法25
• 2.3 火针疗法25-26
• 2.4 温针灸疗法26-27
• 2.5 针刀及其他疗法27-28
• 参考文献28-30
• 综述三 细胞因子在KOA机制中的作用和针灸对细胞因子含量的影响30-38
• 1. 细胞因子在KOA机制中的作用30-33
• 1.1 白介素30-31
• 1.2 前列腺素E231
• 1.3 基质金属蛋白酶131
• 1.4 一氧化氮31-32
• 1.5 肿瘤坏死因子α32
• 1.6 转化生长因子β32-33
• 1.7 胰岛素样生长因子133
• 1.8 骨形态发生蛋白33
• 2. 针灸对细胞因子含量的影响33-36
• 2.1 针灸对白介素含量的影响34
• 2.2 针灸对金属蛋白酶含量的影响34
• 2.3 针灸对生长因子含量的影响34-36
• 参考文献36-38
• 前言38-39
• 实验39-50
• 1. 实验材料39-40
• 1.1 实验动物39
• 1.2 主要试剂及设备39-40
• 1.3 温针灸器具40
• 2. 实验方法40-43
• 2.1 动物分组40
• 2.2 模型制备40
• 2.3 实验干预40-41
• 2.4 标本的采集与保存41-42
• 2.5 膝关节肿胀、疼痛程度观察42
• 2.6 指标检测42-43
• 2.7 统计学方法43
• 2.8 误差控制43
• 3. 结果43-50
• 3.1 各组兔膝关节外观肉眼观察和运动步态观察44
• 3.2 各组兔膝关节治疗前后Lequesne MG评估44-46
• 3.3 各组兔膝关节软骨观察46-47
• 3.4 光镜下膝关节软骨形态47
• 3.5 关节软骨中IL-1β含量47
• 3.6 关节软骨中MMP-1含量47-50
• 讨论50-60
• 1 KOA动物模型的讨论50-53
• 1.1 改良Hulth模型50-51
• 1.2 膝关节腔内木瓜蛋白酶注射模型51-52
• 1.3 骸韧带内侧缺损构建模型52
• 1.4 关节制动模型52
• 1.5 本实验模型选则的讨论52-53
• 2 细胞因子的讨论53-56
• 2.1 损伤性细胞因子54-55
• 2.2 保护性细胞因子55-56
• 2.3 本实验选取指标的讨论56
• 3 穴位选取的讨论56-57
• 4 干预方法的讨论57
• 5 对膝关节、软骨组织的观察57-58
• 6 温针灸对膝关节肿胀程度、疼痛程度、活动范围和步态的影响58
• 7 温针灸对KOA模型兔关节软骨IL-1β、MMP-1含量的影响58
• 8 存在的问题与展望58-60
• 结论60-61
• 参考文献61-63
• 附录63-67
• 致谢67-68
• 个人简历68

【参考文献】

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本文编号：1031381