增强的蛋白质反式剪接作用提高肝脏靶向双载体凝血第八因子转基因小鼠的血浆凝血活性

发布时间：2017-10-16 07:03

  本文关键词：增强的蛋白质反式剪接作用提高肝脏靶向双载体凝血第八因子转基因小鼠的血浆凝血活性

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【摘要】：基于蛋白质反式剪接的双载体转凝血第八因子(FⅧ)基因受到剪接效率低的不利影响,本研究旨在增强蛋白质剪接元件蛋白内含子(intein)之间的相互作用,通过改善蛋白质反式剪接效率提高小鼠体内双载体转FⅧ基因后血浆剪接FⅧ蛋白的分泌量和凝血活性.近期培养细胞水平证明,FⅧ重链和轻链分别进行Cys点突变(Met226Cys和Asp1828Cys)后,可形成链间二硫键,并提高蛋白质剪接效率产生更多的FⅧ蛋白.在此基础上,将蛋白内含子融合到含Cys点突变的人FⅧ重链和轻链基因,构建一对表达载体,门静脉注射C57BL/6小鼠进行肝脏靶向转基因.48h后分别检测小鼠血浆中分泌的人FⅧ蛋白量和由其所产生的凝血活性,结果显示FⅧ重链抗原分泌量为(442±151)ng/mL,凝血活性为(1.46±0.37)IU/mL,接近于单载体转FⅧ基因产生的血浆凝血活性((1.79±0.59)IU/mL),明显高于双载体转FⅧ基因对照小鼠血浆的重链分泌量((305±103)ng/mL)和血浆凝血活性((0.85±0.23)IU/mL).结果表明,链间二硫键交联可通过改善蛋白质反式剪接效率提高双载体转FⅧ基因的功效.
【作者单位】： 鲁东大学生命科学学院;烟台毓璜顶医院血液科;
【关键词】： 凝血第八因子 蛋白质反式剪接 双载体转基因 血浆凝血活性
【基金】：山东省自然科学基金(批准号:ZR2010CM061) 教育部留学回国人员科研启动基金(批准号:20071108)资助项目
【分类号】：R341
【正文快照】： 运用基于蛋白质反式剪接的双载体转凝血第八因子(FⅧ)的重链和轻链基因,表达的重链和轻链多肽在蛋白内含子(intein)介导的蛋白质反式剪接作用下,形成完整的功能FⅧ蛋白,为利用双AAV载体转FⅧ基因,克服其容量限制、发挥其介导基因持续稳定表达等优点提供了依据[1].尽管蛋白质

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 朱甫祥;刘泽隆;缪静;屈慧鸽;迟晓艳;;Met662和Asp1828的Cys突变增强蛋白内含子对共表达的BDD-FVⅢ重链和轻链的剪接[J];中国生物化学与分子生物学报;2012年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 朱甫祥;杨树德;刘泽隆;屈慧鸽;迟晓艳;;vWF-△Pro改善基于蛋白质剪接的双载体BDD-FⅧ基因转移[J];中国生物化学与分子生物学报;2010年08期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 朱甫祥;杨树德;刘泽隆;缪静;屈慧鸽;迟晓艳;;酸性区3融合重链促进基于蛋白质内含子的双载体B域缺失型凝血因子Ⅷ转基因表达[J];生物化学与生物物理进展;2010年11期

2 朱甫祥;杨树德;刘泽隆;缪静;屈慧鸽;迟晓艳;;内含肽介导三段vWF基因真核细胞转移的翻译后连接及其功能性多聚体形成[J];生物化学与生物物理进展;2011年01期

3 朱甫祥;杨树德;刘泽隆;缪静;屈慧鸽;迟晓艳;;二硫键形成促进双载体转断裂B区缺失型凝血因子Ⅷ基因[J];生物化学与生物物理进展;2012年02期

4 朱甫祥;刘泽隆;屈慧鸽;迟晓艳;;内含肽介导F309SfVⅢ的连接和重链分泌的增强[J];生理学报;2009年06期

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本文编号：1041271