粉尘螨变应原DerfMag29的克

发布时间：2017-10-16 18:38

  本文关键词：粉尘螨变应原DerfMag29的克隆、表达及生物信息学分析

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【摘要】：提取粉尘螨总RNA,根据GenBank中的序列(登录号为AY283281.1)设计并合成引物,RT-PCR扩增Mag 29全长基因,克隆至pCold TF DNA载体,转化至大肠埃希菌(E.coli)JM109,取阳性克隆测序鉴定。将pCold TF-Mag 29质粒转化至BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证表达产物,采用生物信息学软件预测Mag 29的结构、理化特性和生物进化关系。RT-PCR产物电泳结果显示,在429 bp处有一条带,与Mag 29基因大小一致,测序鉴定表明质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,表达产物的全细胞、上清和沉淀物中均有相对分子质量(M r)为63 000的蛋白表达,与预测值一致,其中上清中蛋白表达量高于沉淀。生物信息学分析显示,该蛋白是由142个氨基酸组成的M r15 100的分子,二级结构由α螺旋(55.63%)、延伸主链(3.52%)和无规则卷曲(40.85%)组成,是亲水性细胞质蛋白,与热休克蛋白70家族具有较高同源性。
【作者单位】： 盐城卫生职业技术学院医学检验学院;
【关键词】： 粉尘螨 变应原 生物信息学
【基金】：国家自然科学基金(No.31272369,81001330,30660166)~~
【分类号】：R384.4
【正文快照】： 尘螨是室内变应原的最主要来源之一,与哮喘、过敏性皮炎等过敏性疾病的发生密切相关。其中与人类过敏性疾病关系最为密切的有屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)和粉尘螨(Dermatophagoides farinae)。国内关于粉尘螨主要变应原1类、2类变应原相关研究较多[1,2],本课题组

【参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：1044318