人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用

发布时间：2017-10-16 19:34

  本文关键词：人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用

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【摘要】：目的制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E.coli BL21中表达后纯化,获得目的抗原。应用传统融合杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体,常规检测单抗亚类和效价,竞争抑制实验鉴定单抗特异性。用流式细胞术和免疫组织化学法分别检测ASGPR在多种肝源性与非肝源性细胞系以及多种肝组织中的表达。结果制备的单克隆抗体亚型为IgG1,效价达1鐩12 800。竞争抑制实验结果显示该单抗具有很好的ASGPR结合特异性,而且识别的肽段位于ASGPR胞外段。流式细胞术检测结果显示,ASGPR不同程度地表达于肝源性细胞系,但不表达于非肝源性细胞系。免疫组织化学检测结果显示,ASGPR专一性表达于正常肝组织和肝癌组织,在肝癌组织的表达与分化程度有关,高分化肝癌中的阳性率高于低分化肝癌(75.0%vs 28.6%,P0.05)。结论成功制备高特异性人ASGPR小鼠单克隆抗体,适用于用流式细胞术和免疫组织化学法检测ASGPR表达,可用于临床病理鉴定原发性肝癌与转移性肝癌。
【作者单位】： 苏州大学医学部临床医学院;第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤研究室;
【关键词】： 去唾液酸糖蛋白受体 单克隆抗体 肝肿瘤 流式细胞术 免疫组织化学
【基金】：国家传染病重大专项课题(2012ZX10002012-010) 国家高技术研究发展计划(“863”计划,2007AA02Z461) 国家自然科学基金(81172207,81272669)~~
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein recep-tor,ASGPR)又称肝凝集素或肝糖凝集蛋白[1],专一性表达于肝实质细胞表面,主要生理功能为清除外周血循环中含有D-半乳糖残基或N-乙酰半乳糖胺残基的糖蛋白、脂蛋白和凋亡细胞[1-2]。鉴于其肝细胞表达特异性及独特的生理功能,ASGPR

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘嘉;丁红晖;杨燕;胡斌;余源;黄红平;陆蒙吉;杨东亮;;抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年10期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 宁慧龙;彭晓春;;核-壳型树状大分子的研究进展[J];广州化工;2013年19期

2 胡斌;杨燕;刘嘉;马智勇;黄红平;刘慎沛;余源;郝友华;王宝菊;陆蒙吉;杨东亮;;Establishment of a Functional Cell Line Expressing both Subunits of H1a and H2c of Human Hepatocyte Surface Molecule ASGPR[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2010年05期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 胡斌;肝脏靶向治疗载体系统的基础研究[D];华中科技大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 臧林泉;邱鹏新;肖茹;颜光美;;YZ-2蛋白的生物信息学分析及其多克隆抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年02期

2 王超;田拥军;张娥娟;吴洪坤;刘嘉;王宝菊;赵西平;杨东亮;;截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白原核表达、多克隆抗体的制备和鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2008年05期

【相似文献】

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1 高慧萍;蒋华;王华茂;李宗海;;抗EGFRvⅢ/EGFR单抗9B9的制备和鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2009年04期

2 闵密克,朱勇,金伯泉,贾卫,刘雪松;一组小鼠抗大鼠单克隆抗体的鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2000年01期

3 张军;马远方;刘广超;李淑莲;卢锋;;抗人DR5单克隆抗体对人肝细胞系HL7702的凋亡作用[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期

4 张军;马远方;刘广超;李淑莲;;抗人DR5单抗对人肝癌细胞系的凋亡作用[J];河南大学学报(医学版);2007年01期

5 柯杭君;喻明霞;王晶;石文芳;姜小丹;冯玮;李卓娅;;人跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)特异性单克隆抗体的制备、鉴定及功能初探[J];中国免疫学杂志;2007年06期

6 张尚权,王雄彪,潘惠忠,谈立松;抗肝癌单克隆抗体Hepama I丝裂霉素C结合物制备及其细胞毒特性[J];第一军医大学学报;1997年01期

7 瞿秋霞;陈永井;葛彦;王勤;陈成;杨明峰;张学光;;抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年02期

8 刘莹;李德敏;徐小宁;刘雪松;金伯泉;;抗CD1d单克隆抗体的制备及其识别结构域的鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年10期

9 刘瑞振;张长弓;何琼;苏金华;陈彩霞;陈福;庄国洪;;抗人DcR3单克隆抗体的制备、鉴定及应用[J];免疫学杂志;2009年01期

10 石琳;何大水;冯春玲;袁向飞;屈浩;黄丽华;张丽艳;王冬梅;张毅;张宇光;;基因疫苗脾内免疫制备抗人c-kit单克隆抗体及其初步鉴定[J];中国免疫学杂志;2008年07期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杜雪梅;唐丽;任飞W，

本文编号：1044541