单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

发布时间：2017-10-18 09:08

  本文关键词：单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

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【摘要】：为深入研究2F5和4E10抗体,构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒,进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术,获得2F5-scFv和4E10-scFv基因,将其插入原核表达载体pET-28a(+)上,获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta-gami2(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测发现,2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在,重组蛋白分子量分别约为27 kD、29 kD。变性条件下,利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化,经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA检测表明,制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性。
【作者单位】： 西北农林科技大学生命科学学院;
【关键词】： HIV- gp MPER F E 单链抗体
【基金】：教育部新世纪优秀人才计划(NCET-09-0625)
【分类号】：R392
【正文快照】： 自1981年美国发现首例由HIV-1型引发的艾滋病病例以来,至2010年为止,全球有近6 500万人感染了艾滋病[1]。艾滋病已成为危害全球的一种严重传染性疾病[2],但是目前尚无有效的治疗方法。HIV-1的包膜蛋白gp41包含大量特异性的抗原表位,是一种良好的早期诊断HIV感染的抗原标志物[3

【参考文献】

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本文编号：1054129