用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究

发布时间：2017-10-19 18:10

  本文关键词：用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究

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【摘要】：目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。
【作者单位】： 安徽大学生命科学学院;军事医学科学院生物工程研究所;
【关键词】： 奈瑟球菌 脑膜炎 O-糖基化修饰系统 PilE PglL 大肠杆菌 O型多糖基因簇 多糖-蛋白结合疫苗
【基金】：国家自然科学基金青年科学基金资助项目(31200082)
【分类号】：R392
【正文快照】： 在细菌疫苗研制领域,多糖疫苗一直占据着重要位置。然而,多糖作为T细胞非依赖型抗原,免疫原性较弱[1]。目前,多糖疫苗的研究重点已转向更有优势的多糖-蛋白结合疫苗[2,3],但其制备多为化学方法,存在修饰产物不均一和成本高的缺陷[3,4]。近年来,在细菌中发现了多种蛋白质糖基化

【共引文献】

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1 李艳青;夏海波;张修国;;辣椒疫霉(Phytophthora capsici)多聚半乳糖醛酸酶PCIPG2N-糖基化突变体的构建与表达分析[J];安徽农业大学学报;2014年05期

2 白国旺;朱力;王恒j;;病原细菌糖蛋白研究进展[J];军事医学;2013年10期

3 潘超;朱力;王恒j;;病原细菌多糖疫苗和多糖结合疫苗研究进展[J];生物技术通讯;2013年05期

4 马中瑞;韩东雷;赵骏菲;陈梦琳;陈敏;;利用大肠杆菌生产N-糖蛋白和糖蛋白疫苗的研究进展[J];中国生物工程杂志;2013年11期

5 王雯;孙鹏;徐敏锐;徐威;吴军;;病原菌多糖基因簇在大肠杆菌中的克隆[J];生物技术通讯;2014年06期

6 郑恒光;陈君琛;汤葆莎;吴俐;翁敏R，

本文编号：1062566