肠道病毒71型VP1蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

发布时间：2017-10-20 17:19

  本文关键词：肠道病毒71型VP1蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

  更多相关文章： 肠道病毒型 VP蛋白 单克隆抗体

【摘要】：目的:制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)VP1外壳蛋白单克隆抗体。方法:利用重组纯化的EV71-VP1蛋白为抗原免疫BALB/c鼠,按常规杂交瘤技术进行细胞融合,对阳性杂交瘤细胞进行筛选及亚克隆,获得1株能稳定分泌抗EV71-VP1抗体的杂交瘤细胞株6F2B9,细胞体外扩大培养后的上清用Protein G柱纯化,超滤后用BCA法测其浓度,用免疫球蛋白亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体亚型,间接ELISA方法检测其效价和特异性,间接免疫荧光法检测其与EV71病毒的特异性结合能力。结果:本研究得到的抗EV71-VP1抗体DSE-136,纯化后浓度为1.9 g/L,免疫球蛋白亚类为IgG2b,轻链属于κ链;间接ELISA检测效价为1∶3.2×105;间接免疫荧光结果显示其可与EV71病毒特异性结合。结论:成功制备出1个效价高、特异性好的抗EV71-VP1单克隆抗体DSE-136,为VP1抗原诊断、疫苗研发及其效果评价奠定了基础。
【作者单位】： 南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系;江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所;南京农业大学动物医学系;
【关键词】： 肠道病毒型 VP蛋白 单克隆抗体
【基金】：国家科技重大专项(2008ZX10002-001,2009ZX10004-904) 江苏省医学重点人才项目(RC2011082)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 手足口病是5岁以下婴幼儿中的常见传染病,可由多种肠道病毒引起[1],主要为肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇A组16型(cox-sackievirus A16,CoxA16)。与coxA16相比,EV71除可引起手足口病和疱疹性咽峡炎外,尚可引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、急性迟缓

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 詹峰;曾晓燕;张晓;周顺;徐言;张建平;焦永军;;抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年05期

【共引文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 李晓;抗Luman募集因子N端蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[D];西北农林科技大学;2012年

2 徐言;抗高尔基体蛋白GP73单克隆抗体的制备及初步应用[D];南京医科大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 查斌山;刘开坤;刘悦芳;周顺;朱进;冯振卿;王轩;张建平;;SPP-1、GDF-15和CXCL-1在人小肝癌中表达的初步研究[J];武汉大学学报(医学版);2009年01期

2 刘开坤;查斌山;刘悦芳;朱进;冯振卿;张建平;;GDF15在大鼠早期肝癌和人小肝癌组织中的表达[J];南京医科大学学报(自然科学版);2008年04期

3 周群芳;鞠吉雨;郎景和;;抗人骨桥蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年01期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨国威,何雅清,薛颖,周世力,马骊,金奇;肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichia pastoris酵母中的表达[J];病毒学报;2003年02期

2 杨秀惠;严延生;何爱华;周勇;张红榕;潘伟毅;许江阳;林其财;;肠道病毒71型(EV71)感染性克隆的构建[J];中国人兽共患病学报;2010年05期

3 檀晓娟;许文波;;肠道病毒71型的分子流行病学现况[J];中国疫苗和免疫;2008年04期

4 何雅青;杨洪;李琳琳;谭洁;毛丽莎;阳帆;刘建军;吕星;周丽;;深圳地区2001~2004年肠道病毒71型部分VP1区基因分析[J];病毒学报;2006年05期

5 郑锦绣;程险峰;;肠道病毒71型的研究概况[J];中国卫生检验杂志;2009年03期

6 何雅青,杨帆,李良成,金奇;肠道病毒71型中国分离株基因组3区的分析[J];中华实验和临床病毒学杂志;2003年04期

7 钟述猷;由单克隆抗体确定的人类T淋巴细胞—新亚类的分离及其部分特征[J];国际免疫学杂志;1983年05期

8 陈善华;;用于诊断试验和亲和层析的单克隆抗体;抗体工程的初步阶段[J];国际生物制品学杂志;1983年03期

9 Berndt MC;杜晓平;Berndt C;阮长耿;;免疫沉淀法鉴定抗人血小板单克隆抗体识别的抗原[J];苏州大学学报(医学版);1986年03期

10 刘尔翔;李文渌;刘宝丰;樊汝恭;毛映红;;三株抗恶性疟单克隆抗体(M26-32,F5-3F9,F5-4E9)的鉴定[J];生物工程学报;1986年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

2 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年

3 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年

4 杜雪梅;唐丽;任飞W，

本文编号：1068391