DNA疫苗的不同构象在体内外表达差异研究

发布时间：2017-10-22 12:33

  本文关键词：DNA疫苗的不同构象在体内外表达差异研究

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【摘要】：目的:研究DNA疫苗构象对体内和体外表达的影响。方法:分别构建绿色荧光蛋白表达质粒(pcDNA3.1-EGFP)和萤火虫荧光素酶表达质粒(pDRVISV1.0-Fluc),对其存在的3种拓扑形式(包括超螺旋、线性、闭环切刻等)和反复冻融状态对表达效率的影响进行分析,前者用脂质体介导转染293FT细胞,用流式细胞仪检测EGFP的表达情况;后者通过接种BALB/c小鼠,用活体成像技术监测荧光素酶的表达情况。结果:对pcDNA3.1-EGFP质粒,流式细胞仪检测其转染293FT细胞48 h后显示,4种处理组的质粒表达EGFP的效率和荧光强度有所差异,依次为新鲜制备质粒(89.76%,2682.68)反复冻融处理质粒(76.35%,2313.48)闭环切刻质粒(68.45%,1245.95)线性质粒(38.28%,929.5)。对pDRVISV1.0-Fluc质粒,采用小鼠活体成像技术持续观察接种后28 d的体内荧光素酶的荧光信号强度情况,结果显示:接种后0.2 d观察到荧光,之后强度持续开始增强,至第5 d达到平台期,维持至18 d。质粒各处理组的荧光强度组间有显著差异,依次为新鲜制备质粒(108.6)反复冻融处理质粒(108.4)线性质粒(108.3)切刻质粒(108.0)。2种质粒不同构象的体内体外表达中,均是新鲜制备质粒的表达量最高,因其中超螺旋为其主要构象。结论:质粒中超螺旋比例高时其转染效率及表达量最高,提高超螺旋比例是DNA疫苗质量控制的关键。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院
【关键词】： 拓扑形式 构象 超螺旋 荧光素酶 活体成像技术 疫苗质量控制
【基金】：国家科技重大专项十二五课题基金(2012ZX10004701-001)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： DNA疫苗是20世纪90年代初从基因治疗领域发展起来的一种全新免疫制剂。随着人们对核酸疫苗的研究日益深入,也逐渐发现了其诸多优点,例如可诱导机体产生细胞和体液免疫应答;在细胞内产生抗原多肽,以天然的构象递呈给免疫识别系统,更接近于自然感染;不同的核酸疫苗具有共同的理

【共引文献】

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1 李文化;Ca～(2+)诱导大肠杆菌摄取外源DNA的研究[D];武汉大学;2004年

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本文编号：1078420