大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究

发布时间：2017-10-26 07:21

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞的培养鉴定以及向神经干细胞分化的实验研究

  更多相关文章： 骨髓间充质干细胞 全骨髓贴壁培养法 诱导分化 神经干细胞 酸性成纤维细胞生长因子

【摘要】：目的:体外培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究其生物学特性,初步探索酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)诱导其向神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的可行性。方法:全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察其形态特征,MTT法绘制生长曲线,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定细胞周期并鉴定细胞表面标志物。用80 ng/ml aFGF的无血清DMEM/F12培养液诱导大鼠BMSCs向NSCs分化,镜下观察细胞形态特征,免疫荧光染色方法检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)的表达。结果:大鼠BMSCs贴壁生长,呈梭形,多角形。第1、3、5代BMSCs的生长曲线均呈S形,活性无明显差异。细胞周期显示94.34%BMSCs处于G0/G1期,有较强的分裂增殖能力。FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性,CD45表达阴性。诱导6 h后细胞的胞体收缩成椭圆形或球形并伸出细长突起,免疫荧光染色显示Nestin表达阳性,继续诱导发现双极和多极细胞增多,诱导6 d后相互连接成网状,成典型的神经元样细胞,NSE表达阳性。结论:全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的BMSCs,细胞生长稳定、增殖快、可多次传代,具有干细胞特性。经aFGF诱导后具有向NSCs分化的潜能,NSCs能进一步分化为神经元样细胞。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科;重庆市急救医疗中心整形颅颌面外科;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 全骨髓贴壁培养法 诱导分化 神经干细胞 酸性成纤维细胞生长因子
【基金】：重庆市科委自然科学基金资助项目(编号:2010BB5394)
【分类号】：R329
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)是骨髓细胞中的非造血干细胞,为成纤维样细胞,有较强的可塑性,不仅能被诱导分化为骨、软骨、脂肪等中胚层细胞,还能在特定培养条件下分化为神经干细胞(neural stem cells,NSCs)、神经元等[1-2]。BMSCs取材方便,能

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本文编号：1097610