O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定

发布时间：2017-10-29 22:38

  本文关键词：O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体识别表位模拟肽的筛选鉴定

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【摘要】：目的:以纯化的有高度特异性的IXiao3G6单抗为靶分子,对噬菌体随机7肽库进行淘筛,以期筛选到与O1群小川型霍乱弧菌单抗有高亲和力的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的研制奠定基础。方法:运用噬菌体随机7肽库技术,以纯化的IXiao3G6单抗为靶蛋白,进行噬菌体随机肽库3轮筛选,以双抗夹心ELISA和竞争抑制实验分析获得的噬菌体短肽与筛选配基的结合能力及特异性,并进行阳性克隆序列测定和同源性分析。结果:3轮筛选后,阳性噬菌体得到有效富集,夹心ELISA检测随机挑取的25个噬菌体克隆,有22个噬菌体克隆为阳性,测序表明其中20个阳性克隆的氨基酸序列完全一致,均为APAIPAS。对该序列同源性分析,未发现有相同的已知序列。竞争抑制实验表明,O1群小川型霍乱弧菌脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)能很好地抑制阳性克隆与IXiao3G6McAb的结合,抑制程度随LPS浓度的升高而增加,而对照细菌的LPS则不具有相应的抑制作用,进一步提示噬菌体克隆展示肽模拟了O1群小川型霍乱弧菌LPS抗原表位。结论:筛选到模拟O1群小川型霍乱弧菌LPS的抗原表位的模拟肽,为基于表位的霍乱弧菌模拟多肽疫苗的开发与设计提供了实验依据。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第二医院输血科;重庆医科大学附属第二医院检验科;重庆医科大学临床医学一系;重庆医科大学感染性疾病教育部重点实验室;
【关键词】： O群小川型霍乱弧菌 单克隆抗体 噬菌体随机肽库 模拟肽
【基金】：国家“863”高科技发展计划资助项目(编号:2002AA215015) 重庆市医学科研计划资助项目(编号:2009-2-200)
【分类号】：R392
【正文快照】： 霍乱在世界范围内具有很高的发病率和死亡率,每年发病人数估计约500万,至少引起14万人死亡,而有效的霍乱控制目标在于将病死率降至1%以下[1]。早期的灭活菌苗已证实对控制霍乱无效,世界卫生组织已不再推荐该疫苗的使用;目前研制的口服疫苗具有较好的安全性和免疫保护率,但仍然

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 陈锐;核糖体展示人源性scFv文库的构建及筛选抗人LBP抗体的局限性分析[D];第三军医大学;2009年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 葛晓冬,刘友生,王晓东,王长松,邓军,李红;人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年02期

2 高霞,张宏岩,付鸣,王世平;霍乱弧菌检验研究进展[J];中国卫生工程学;2002年03期

3 蒋力生,陈鹏;脓毒症与内毒素血症的治疗现状与展望[J];中国普外基础与临床杂志;2004年06期

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本文编号：1114977