鼠疫菌Fur蛋白对waaA的转录调控研究

发布时间：2017-10-30 07:11

  本文关键词：鼠疫菌Fur蛋白对waaA的转录调控研究

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【摘要】：目的从转录水平上研究鼠疫耶尔森菌Fur蛋白对waaA的转录调控机制。方法提取鼠疫菌野生株(WT)和fur突变株(Δfur)的总RNA,采用引物延伸实验研究waaA的转录起始位点,并根据产物的丰度判断Fur蛋白对waaA的调控关系。构建克隆有waaA上游启动子区的LacZ重组质粒,将重组质粒转入WT和Δfur中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中的waaA启动子活性,进一步验证Fur蛋白对waaA的调控关系。PCR扩增waaA启动子区DNA序列全长,并纯化鼠疫菌His-Fur蛋白,通过体外的凝胶阻滞实验,即电泳迁移率变动实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验验证His-Fur蛋白对waaA启动子区是否具有直接的结合作用。结果与结论 DNaseⅠ足迹实验表明,Fur蛋白对waaA启动子区的结合位置为-204至-150之间的碱基(翻译起始位点为+1);引物延伸实验显示waaA有一个转录起始位点T(-26),且该位点的转录活性直接被Fur蛋白激活。
【作者单位】： 军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全国家重点实验室;江苏大学基础医学与医学技术学院;重庆医科大学公共卫生与管理学院;
【关键词】： 鼠疫耶尔森菌 转录调控 Fur waaA
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30930001)
【分类号】：R341
【正文快照】： 鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌,Yersinia pestis)是烈性传染病鼠疫的病原菌,人类通常被带菌蚤体叮咬而被感染[1]。鼠疫菌在蚤体前胃中能形成生物膜而阻止血液流进蚤胃中,使蚤时刻处于饥饿状态,导致蚤不断叮咬宿主,从而不断引起新的感染。可见,鼠疫菌的生物膜在鼠疫菌传播过程中起着关

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