共培养下内皮祖细胞对神经干细胞增殖及分化的影响

发布时间：2017-10-30 07:08

  本文关键词：共培养下内皮祖细胞对神经干细胞增殖及分化的影响

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【摘要】：目的第一，解剖大鼠脊髓组织分离获得NSCs，并进行NSCs特异性标志物Nestin检测，以证实目的细胞即为NSCs；第二，在体外通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再以多种细胞因子诱导其分化得到EPCs，最后行EPCs的特异性检测，证实目的细胞为EPCs；第三，在Transwell小室共培养模型中培养EPCs和NSCs，研究EPCs对NSCs增殖及分化的影响，为以后EPCs相关的细胞移植治疗脊髓损伤（SCI）提供坚实的理论基础，以及新的思路及方法。 方法运用成熟的分离、培养及鉴定方法获得SD大鼠的脊髓NSCs及外周血EPCs，再将二者置于Transwell小室进行体外共培养，以单纯的NSCs培养为对照，于第4d对神经球的数目、直径进行测算，测算后将载有EPCs的Transwell小室上层移去，对下层的NSCs进行诱导分化培养，第7d行MAP-2免疫荧光染色，荧光显微镜下观察抗原表达并计算NSCs分化神经元百分率，最后将实验组与对照组数据进行统计学分析。 结果共培养第4d于100倍视野下行NSCs球计数并测算NSCs球直径，实验组NSCs球平均数目为（10.3±2.2）个，平均直径为（48.0±5.3）μm，对照组NSCs球平均数目为（6.3±1.7）个，平均直径为（33.3±5.9）μm，可见共培养的NSCs球数目实验组明显多于对照组,直径也呈现出大于对照组的趋势;共培养的NSCs神经元分化率为（32.2±1.9）%，也明显高于对照组的（14.7±1.8）%。 结论第一，通过解剖大鼠脊髓组织分离NSCs方法可行，经培养后获得细胞球均表达NSCs特异性标志物Nestin，目的细胞为NSCs明确；第二，在体外通过密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，再以多种细胞因子诱导其分化得到EPCs的方法可行，并且可以通过EPCs的特异性检测，证实其为目的细胞EPCs；第三，在Transwell小室共培养模型下EPCs在能促进NSCs增殖，并在一定程度上诱导NSCs向神经元分化。这一实验成果的发现，为后续研究EPCs促进NSCs增殖及向神经元分化的机制提供了模板，并奠定了坚实的理论基础，更为以后EPCs相关的细胞移植治疗脊髓损伤（SCI）提供了新的思路及方法。
【关键词】：内皮祖细胞 神经干细胞 共培养 脊髓损伤
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 1 引言10-12
• 2 材料和方法12-20
• 3 结果20-24
• 4 讨论24-28
• 5 结论28-29
• 6 参考文献29-32
• 附录32-33
• 致谢33-34
• 综述34-42
• 参考文献40-42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 何红媛,王萍,夏冬,吴绍华;干细胞调控机制及体外培养影响因素的研究[J];四川解剖学杂志;2002年04期

2 沈政;尹宗生;高维陆;张辉;;脊髓损伤后反应性星形胶质细胞的分离培养及多能性鉴定[J];安徽医科大学学报;2012年06期

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本文编号：1116615