人凝血因子Ⅶ基因在CHO-K1细胞中的瞬时表达与鉴定

发布时间：2017-10-31 16:33

  本文关键词：人凝血因子Ⅶ基因在CHO-K1细胞中的瞬时表达与鉴定

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【摘要】：目的在CHO-K1细胞中瞬时表达所克隆的人凝血因子Ⅶ(FⅦ)的cDNA序列并表达其产物。方法首先从HepG2细胞中克隆人FⅦcDNA序列,将克隆得到的序列连接到pMD18-T载体上经测序验证后,将其与pcDNA3.1载体连接,构建得到重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ。将构建得到的表达质粒瞬时转染CHO-K1细胞,72 h取样,采用ELISA、Western blotting等方法对细胞上清液和细胞裂解物作鉴定。结果克隆得到的序列经NCBI比对后为FⅦ转录突变体Ⅱ基因序列,克隆得到的基因未见氨基酸突变,重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ经PCR、双酶切、测序验证正确。ELISA法未在上清中检测到目的蛋白,而在细胞裂解液中检测到了目的蛋白;Western blotting检测到表达产物有与FⅦ标准品类似的分子量为50 kD左右的特异性条带。结论在转染后的CHO-K1细胞裂解液上清中成功表达了hFⅦ蛋白。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院输血研究所;
【关键词】： 人凝血因子Ⅶ CHO-K细胞 克隆 基因表达
【分类号】：R329
【正文快照】： 人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ)是1种维生素K依赖性单链糖蛋白,在参与凝血过程中会导致纤原的产生[1,2],在血液凝固过程中发挥极其重要的作用,是凝血块形成起始的关键分子之一[3,4]。FⅦ可分泌到外周血中,主要以凝血酶原的形式存在[5~7],其可以通过活化因子Ⅹ

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本文编号：1122927