睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996类固醇脱氢酶3α-HSD的高效表达与纯化

发布时间：2017-11-01 09:32

  本文关键词：睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996类固醇脱氢酶3α-HSD的高效表达与纯化

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【摘要】：利用分子克隆的方法扩增与克隆睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,构建以pET-15b为载体的表达工程菌,IPTG诱导蛋白表达,通过优化表达菌的最佳表达条件得到最大表达量的目的蛋白。诱导后将工程菌裂解,通过硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析,分子筛分离进行纯化,并测定纯化后蛋白的酶活性。结果表明:1)克隆获得了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因并实现了异源表达;2)工程菌的最佳表达条件为:37℃培养,0.6mmol/L IPTG诱导4h,培养基中Zn2+终浓度为0.1mmol/L;3)表达工程菌裂解后用60%硫酸铵沉淀,亲和层析和分子筛分离后得到了纯度高达99%的目的蛋白,纯化后的蛋白保持酶活性。本试验成功克隆表达了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因,建立了3α-HSD的高效表达与纯化方法,为相应抗体的制备与水资源中的类固醇激素检测方法的建立提供基础。
【作者单位】： 沈阳农业大学食品学院;中国检验检疫科学研究院;
【关键词】： 睾丸酮丛毛单胞菌 α-HSD 诱导表达 纯化
【基金】：质检公益性行业科研专项(201110018)
【分类号】：R392
【正文快照】： 大量研究表明,人类的生殖障碍、发育异常及某些癌症(如:乳腺癌、睾丸癌和卵巢癌等)与环境中内分泌干扰物的分布水平密切相关[1]。在众多的环境内分泌干扰物中,类固醇激素的干扰活性最强并且难以降解,可以长期存在环境中对人类造成危害,因而受到人们的重点关注。目前,检测水资

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张国华,丛爱日,徐国宾,孙立颖,严岩,夏铁安;睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达[J];北京大学学报(医学版);2005年02期

【共引文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 庄肃静;C.testosteroni工程菌生物学特性研究及在生物修复中的初步应用[D];福建农林大学;2007年

【相似文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 田甜;3α-HSD基因的克隆和表达[D];吉林大学;2007年

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本文编号：1126249