人水甘油通道蛋白9重组质粒的构建及表达

发布时间：2017-11-03 05:04

  本文关键词：人水甘油通道蛋白9重组质粒的构建及表达

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【摘要】：目的:构建人水甘油通道蛋白9(aquaglyceroporin9,AQP9)重组质粒,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达,为阐明AQP9在非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用奠定基础。方法:通过RT-PCR方法从人肝脏组织中获得AQP9基因,插入pEGFP-N1质粒,构建重组质粒pEGFP-N1-AQP9,转染COS-7细胞,通过荧光显微镜检测其转染情况,RT-PCR和Western blot检测AQP9在真核细胞中的表达。结果:PCR及酶切鉴定显示插入人AQP9大小正确。测序鉴定显示,1个碱基发生突变,45位:A→G,为无义突变。通过RT-PCR和Western blot检测到AQP9表达,说明AQP9基因在COS-7细胞中表达并与绿色荧光蛋白融合,且具有免疫原性。结论:成功构建了pEGFP-N1-AQP9重组质粒,并在COS-7细胞中表达,为进一步研究AQP9在NAFLD发生发展中的作用奠定基础。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院消化内科;
【关键词】： 水甘油通道蛋白 非酒精性脂肪肝病 重组质粒
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81070318) 重庆市卫生局科研资助项目(编号:渝卫科教2010-2-100)
【分类号】：R341
【正文快照】： 随着我国人民生活水平提高和西方化的饮食方式,非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver dis-ease,NAFLD)患病率迅速增加,已经成为主要消化系统疾病之一[1-2]。NAFLD与脂肪重新分布有关,而水甘油通道蛋白9(aquaglyceroporin9,AQP9)正是参与脂肪动员运输和肝脏摄取的重要膜

【共引文献】

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本文编号：1134721