联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原

发布时间：2017-11-03 14:08

  本文关键词：联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原

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【摘要】：建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件。加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12 h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9%～20%之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80 000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原。用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万。所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率。
【作者单位】： 中南大学药学院;军事医学科学院放射与辐射医学研究所;北京蛋白质组研究中心 蛋白质组学国家重点实验室 国家蛋白质科学中心(北京);中山大学肿瘤防治中心;北京正旦国际科技有限责任公司;湖南金健药业有限责任公司;
【基金】：863项目(2012AA020205) 国家科技部重大仪器专项(2012YQ18011710)
【分类号】：R392;O657.77
【正文快照】： 具有生物活性的多肽标志物,在肿瘤血清生化学早期诊断中具有独特作用[1-2],而多肽抗体的制备,成为应用相关生化诊断技术必须解决的关键环节[3-6]。由于多肽存在抗原表位少、分子量小(一般低于10 kDa)、缺乏T细胞表位等特点,导致免疫原性弱,难以直接诱导动物机体产生抗体[7],

【二级参考文献】

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1 吴媛媛,包永明,王煈,梁兴超,修志龙;氯霉素全抗原的合成与鉴定[J];化学通报;2005年06期

2 张存政,刘贤进,余向阳,王冬兰,高亮;对硫磷半抗原改造及其免疫抗体[J];南京农业大学学报;2002年04期

3 朱国念,桂文君,郑尊涛,程敬丽,吴刚;吡虫啉人工抗原的合成与鉴定[J];中国农业科学;2005年03期

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本文编号：1136504