利用细胞筛选法从噬菌体抗体库鉴定人源HIV-1单克隆中和抗体

发布时间：2017-11-03 15:01

  本文关键词：利用细胞筛选法从噬菌体抗体库鉴定人源HIV-1单克隆中和抗体

  更多相关文章： HIV- 中和抗体 包膜蛋白 噬菌体抗体库 细胞法筛选

【摘要】：以细胞法从HIV-1CRF07_BC特异性噬菌体抗体库中筛选和鉴定针对病毒包膜蛋白(Envelope,Env)的人源单克隆中和抗体。将pCH064.2-Env质粒转染293T细胞,以表达Env的活细胞淘洗噬菌体抗体库;利用细胞ELISA方法筛选Env特异性噬菌体阳性克隆,并测定抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列;以Ni+2-NTA层析柱纯化抗体Fab,SDS-PAGE分析抗体纯度;采用基于转染细胞和重组蛋白的ELISA以及流式细胞技术分析抗体的结合活性;以HIV-1假病毒系统评价抗体的中和活性。四轮淘洗使细胞特异性噬菌体得到约650倍的高度富集,细胞ELISA筛选到28个抗HIV Env的阳性克隆,序列分析发现五个具有不同VH和VL序列的抗体Fab(2801、2837、2863、2870和2920)。这些抗体与转染env的293T细胞反应,但不与重组表达的可溶性gp120蛋白反应,说明它们有可能针对依赖于Env复合物的空间构象表位。我们发现2801、2863和2870三个Fab抗体对HIV-1CRF07_BC亚型CH120.6毒株具有较强的中和活性,其IC50值分别为2.24μg/mL、0.89μg/mL和3.09μg/mL。其中,2801和2863对B亚型HIV-1毒株SF162具有较强的交叉中和作用,其IC50值分别为0.69μg/mL和3.52μg/mL。提示表达于293T细胞表面的HIV-1 Env可以有效富集和筛选噬菌体抗体库,并能成功分离和鉴定依赖于Env空间构象表位的HIV-1中和抗体。因此本研究为探讨HIV-1中和抗体的反应机制和研发艾滋病疫苗提供了新的技术平台。
【作者单位】： 温州医科大学检验医学院生命科学学院;中国医学科学院病原生物学研究所;
【基金】：国家十二五艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2012ZX10001-008) 国家杰出青年基金(81025009) 国家自然科学基金(81101249)
【分类号】：R392
【正文快照】： 自1981年确认首例艾滋病以来,艾滋病已成为对人类健康和社会稳定威胁最大的感染性疾病之一。全球已有超过6 000万感染者,造成2 500多万人死亡。因此研制一种安全有效的艾滋病疫苗对于预防和控制HIV-1的流行具有重要意义。一个良好的艾滋病疫苗不仅能诱导CD8+细胞免疫反应,也应

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 何玉先,王学,刘顺爱,何忠平,周莹,徐克沂,徐道振;人源抗人免疫缺陷病毒1型噬菌体抗体库的构建及筛选[J];中华实验和临床病毒学杂志;1998年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 舒文祥;余为一;王静;;鸡血清IgG纯化方法研究[J];安徽农业科学;2007年25期

2 郝淑美;李群;王承宇;王化磊;杨松涛;夏咸柱;;H5N1亚型禽流感病毒血凝素蛋白单链抗体基因的克隆及表达[J];病毒学报;2009年01期

3 王丁丁;许天敏;余丽江;苏曼曼;黄树林;宿晓云;陈磊;颜炜群;;应用毕赤酵母分泌表达筛选人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期

4 陈锐;刘友生;朱江;段光杰;葛晓冬;;一种大容量天然人源核糖体展示单链抗体文库的构建[J];重庆医学;2009年09期

5 齐永华;董永军;宁红梅;赵坤;;单链抗体技术在农兽药残留检测方面的研究进展[J];东北农业大学学报;2011年09期

6 郑志明;金社胜;肖希龙;候晓林;;抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选[J];动物医学进展;2010年S1期

7 周捷;臧林泉;冯文彬;潘雪刁;王军业;郭桐;王秀芳;田亮;刘海洋;;肺癌血清中特异性结合多肽的筛选[J];广东医学;2010年08期

8 潘阳;王露楠;;单克隆抗体人源化技术研究进展[J];国际检验医学杂志;2011年13期

9 安宇;王颖;张东杰;柳增善;;抗磺胺二甲嘧啶单链抗体基因的克隆与序列分析[J];黑龙江八一农垦大学学报;2008年06期

10 ;行业会讯[J];黑龙江畜牧兽医;2009年12期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 高丽;杜莹;张忠湛;杨松涛;夏咸柱;高玉伟;;犬细小病毒荧光抗体的制备及其鉴定[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年

2 齐永华;张素霞;吴聪明;沈建忠;;单链抗体技术在兽药残留检测方面的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年

3 郑志明;金社胜;肖希龙;候晓林;;抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 叶刚;采用抗体库优化法对抗肝癌单链抗体人源化改造的研究[D];暨南大学;2007年

2 付永锋;抗刚地弓形虫特异性人源抗体Fab片段的制备和研究[D];复旦大学;2008年

3 陈锐;核糖体展示人源性scFv文库的构建及筛选抗人LBP抗体的局限性分析[D];第三军医大学;2009年

4 张爱华;赭曲霉毒素A免疫检测方法的研究与呕吐毒素生物转化菌NJA-1的鉴定[D];南京农业大学;2010年

5 夏汝山;基因工程抗角蛋白抗体全长人IgG在CHO（dhfr～-）细胞的表达[D];第四军医大学;2004年

6 许铭炎;四川彝族、新疆维族HLA-B基因多态性分析及其应用研究[D];汕头大学;2004年

7 范国英;链霉素残留免疫学快速检测技术研究[D];西北农林科技大学;2007年

8 王缚鲲;重组人抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位sIgA分子的构建表达及特性研究[D];第三军医大学;2007年

9 康振华;大鼠抗人RANTES单克隆抗体在减轻大鼠小肠移植排斥反应中的应用及其人源化[D];第四军医大学;2008年

10 陶艳琳;抗恶性疟原虫特异性人源抗体Fab片段的制备和研究[D];复旦大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 闫晓敏;鱼源Fab噬菌体抗体库的筛选、鉴定及抗SAs抗体的可溶性表达[D];华中农业大学;2010年

2 李兆学;人红细胞单链抗体的制备与血凝试验方法的初步建立[D];河南工业大学;2010年

3 季泽俊;抗DR5多价抗体的抗肿瘤作用[D];河南大学;2011年

4 周捷;以噬菌体展示肽库筛选肺癌清特异性多肽及肿瘤标志物[D];广东药学院;2010年

5 王辉;斑点叉尾洶天然单链噬菌体抗体库的构建及初步鉴定[D];华中农业大学;2011年

6 赵禹;人TRAb噬菌体抗体库的初建[D];天津医科大学;2003年

7 段丽君;人TRAb单链组合文库的构建[D];天津医科大学;2005年

8 黎玉梅;利用噬菌体展示技术制备高致病性禽流感病毒（HPAIV）的单链抗体（ScFv）[D];新疆农业大学;2007年

9 马玲;抗CD22人源化基因工程多价微型抗体的初步表达[D];广西大学;2007年

10 旷瑜;聚乙二醇修饰重组人干扰素ω的药代动力学研究[D];重庆大学;2007年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 马红霞;于湘晖;姜春来;吴永革;孔维;;中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白真核表达载体的构建及稳定表达细胞株的筛选[J];中国生物制品学杂志;2006年04期

2 曹志亮;何玉先;;HIV-1中和抗体和基于抗体的疫苗设计[J];中国生物工程杂志;2010年12期

3 王学,周莹;人免疫缺损病毒1型的中和抗体[J];细胞与分子免疫学杂志;1997年S2期

4 马文彬,冯百芳,陶其敏;小鼠抗E2抗体在体外可以捕获丙型肝炎病毒(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年08期

5 严家新;用加入QS-21的亚单位疫苗诱导HIV-1gp120特异的交叉反应性CTL应答[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1998年03期

6 曹凤,季阳;HIV-1 感染的长期非进展者的特征[J];中国性病艾滋病防治;1997年03期

7 王剑虹;通过接种剂量及接种程序调节对重组HIV-1_(MN)gp160疫苗的免疫应答[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1999年01期

8 胡新韬;洪坤学;邵一鸣;;抗HIV广谱中和血清表位特异性研究进展[J];中国热带医学;2011年05期

9 郑红,朱锡华;HIV疫苗的研究策略及其进展[J];免疫学杂志;2000年S1期

10 康晓平,杨保安,赵慧,祝庆余;从噬菌体库中筛选抗SARS病毒S蛋白的Fab中和活性抗体研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 田代印;符州;王莉佳;何云锋;王成秀;周娟;罗晓菊;;IL-13中和抗体对哮喘小鼠恢复期气道炎症及Th1／Th2功能的影响[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

2 王双;杜韫;孙志伟;;抗人肿瘤坏死因子α人源性中和抗体的研制[A];中国遗传学会“发育、遗传和疾病”研讨会论文汇编集[C];2007年

3 谭斌;刘长明;冉多良;危艳武;张超范;;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)持续感染与保护性免疫应答机制[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年

4 高玉伟;夏咸柱;鞠会艳;贺文琦;杨松涛;黄耕;李德生;王鹏彦;;大熊猫血清犬瘟热病毒中和抗体调查[A];第十一次全国养犬学术研讨会论文集[C];2005年

5 张祯涛;王金宝;周顺;李俊;宋玉才;刘长龙;徐文;倪娇;;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒中和抗体的重组GP5-ELISA的研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年

6 吴焱;伦文辉;赵刚;徐克沂;;R7V抗体及其对HIV长期感染不进展者的意义[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年

7 毛群颖;郭增兵;郝春生;于丹;李秀玲;梁争论;;EV71疫苗中和试验检测标准病毒候选株的研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

8 刘晔;张守峰;张菲;王颖;扈荣良;;动物狂犬病中和抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

9 韩振格;郄中宏;吴萍;满霞;赵兰静;;体检人群血清HBV中和抗体水平调查[A];疗养康复发展的机遇与挑战——中国康复医学会第21届疗养康复学术会议论文汇编[C];2010年

10 夏平安;崔保安;张红英;杨霞;陈丽颖;王亚宾;王新卫;卢中华;;特异性中和抗体终止猪体内PRRSV复制[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 本报记者 梁学梅;伍雪玲：发现抗艾滋病毒中和抗体的桂林人[N];桂林日报;2011年

2 韦绍锋 高飞;我国成功研制HIV中和抗体[N];医药经济报;2004年

3 段文利;SARS康复者体内存在高水平中和抗体[N];健康报;2007年

4 吴国彬;预防肉鸡新城疫接种油苗好[N];江苏农业科技报;2006年

5 吴国彬;肉鸡：建议用ND油苗免疫[N];山东科技报;2006年

6 段文利;我国SARS免疫学研究获得重要进展[N];中国医药报;2007年

7 曾耀英;HIV疫苗 研究思路[N];中国中医药报;2006年

8 欣信;HIV“中和抗体”真人露相[N];医药经济报;2003年

9 蔡小伟邋余荣华;福建治疗禽流感科研获国际性重大突破[N];人民日报;2007年

10 记者 刘霞邋张巍巍;科学家鉴定出HIV病毒抑制基因[N];科技日报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李娜;miR-34a抑制肝癌细胞侵袭转移和甲型减毒嵌合流感病毒诱导HIV-1广谱中和抗体的分子机制研究[D];吉林大学;2011年

2 郭东星;中国HIV-1流行株对广谱中和抗体VRC01敏感性的分子机制研究[D];北京协和医学院;2013年

3 种辉辉;人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）假病毒检测体系的建立与应用[D];吉林大学;2008年

4 王倩;中国HIV/AIDS患者及疾病长期不进展者中和抗体水平及其保守表位氨基酸变异研究[D];中国医科大学;2005年

5 刘沐桑;HIV-1 V2区突变对抗V3区单克隆抗体逃逸的影响[D];北京协和医学院;2011年

6 韦娜;A型肉毒毒素受体和中和抗体研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

7 丁惠;小干扰RNA在抗HCV感染中的应用及HCV包膜蛋白E2诱导小鼠抗体应答的研究[D];第二军医大学;2007年

8 王渊t，

本文编号：1136670