人亲磷脂酸磷脂酶A1基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建

发布时间：2017-11-05 15:24

  本文关键词：人亲磷脂酸磷脂酶A1基因的克隆与序列分析及真核表达载体的构建

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【摘要】：目的克隆人亲磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)基因,分析该酶基因及其蛋白质的序列特征并构建PA-PLA1基因真核表达载体,为该酶生理功能的研究提供实验依据。方法从人的肾脏组织中提取总RNA,逆转录制备cDNA。扩增人PA-PLA1基因并克隆测序。以Vector NTI 8.0、DNASTAR、ORF finder分析所克隆的人PA-PLA1基因及其蛋白质序列。构建真核表达载体pcDNA3.1-PA-PLA1,测序证实后转染小鼠分泌胰岛素细胞株MIN6,以Western blotting检测PA-PLA1蛋白的表达水平。结果人PA-PLA1基因mRNA全长为2 923 bp,编码区长2 238 bp,编码1个由745个氨基酸残基组成的蛋白多肽。序列比对表明所克隆的人PA-PLA1基因与牛PA-PLA1基因同源,并与KIAA0725p和p125基因高度相似,三者在脂肪酶家族中形成亚家族,但KIAA0725p蛋白和p125蛋白具有常见的脂肪酶活性中心保守序列GX-S-XG,而PA-PLA1的该序列为SX-S-XG。真核表达载体pcDNA3.1-PA-PLA1构建正确并在所转染的MIN6细胞中过表达PA-PLA1蛋白。结论 PA-PLA1、KIAA0725p蛋白和p125蛋白在脂肪酶家族中形成亚家族,但PA-PLA1具有独特的脂肪酶活性中心保守序列SX-S-XG。所构建的PA-PLA1基因真核表达载体能在MIN6细胞中过表达小鼠PA-PLA1蛋白。该研究结果将为PA-PLA1生理功能的研究提供实验依据。
【作者单位】： 桂林医学院(医药生物技术重点实验室及生物化学与分子生物学教研室);
【基金】：国家自然科学基金(No:NSFC30860094) 广西自然科学基金(No:桂科自0991258)
【分类号】：R346
【正文快照】： 磷脂酸(phosphatidic acid,PA)是一种具有多种生物学功能的脂类信号分子。文献表明[1],PA是激素、生长因子和细胞因子重要的第二信使,通过活化多种细胞信号转导途径中的蛋白质而在细胞生长、增殖、囊泡输送和激素应答等多种细胞过程发挥调节作用。PA的产生主要通过两种途径,

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本文编号：1144788