猪链球菌2型MRP和EF双基因共表达重组腺病毒载体的构建

发布时间：2017-11-11 03:25

  本文关键词：猪链球菌2型MRP和EF双基因共表达重组腺病毒载体的构建

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【摘要】：旨在构建猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)和胞外因子(EF)双基因共表达重组腺病毒载体。根据猪链球菌2型MRP和EF的基因序列设计合成2对引物,以猪链球菌2型基因组为模板,扩增MRP基因(第1 801-2 513位)和EF基因(第1 783-2 563位)序列,并克隆到pMD18-T载体。然后将MRP基因、IRES元件和EF基因依次定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MRP-IRES-EF,再经PmeⅠ酶切,然后转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒载体质粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF。PacⅠ酶切线性化该重组腺病毒载体质粒,再转染AD-293细胞进行病毒包装,最后对细胞包装的病毒液进行PCR鉴定。结果表明,克隆的MRP和EF基因测序正确,酶切重组穿梭质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物;线性化的重组腺病毒载体质粒rAdeno-CMV-MRP-IRES-EF转染AD-293细胞6 d后也出现明显的细胞病变(CPE),在培养细胞的上清病毒液中也检测到了MRP和EF基因片段。
【作者单位】： 九江学院基础医学院病原生物学教研室;江西省系统生物学临床应用重点实验室;宁夏医科大学总医院医学实验中心;
【基金】：江西省教育厅科技项目(GJJ12624) 九江学院博士科研启动项目(8870909)
【分类号】：S852.61;R346
【正文快照】： 猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)是一种重要的人畜共患病的病原体,可引起猪的败血症、脑膜炎、支气管肺炎、关节炎和新生仔猪的大量死亡[1];同时也可引起人的感染,导致筋膜炎、脑膜炎和中毒性休克综合征等严重病症[2]。近年来,猪链球菌病在国内外时有流行或暴发,

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 曹慧青;多基因共表达载体的构建策略[J];国外医学(分子生物学分册);2002年01期

2 欧瑜,陆承平;猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因片段的克隆与表达[J];农业生物技术学报;2002年01期

3 欧瑜,陆承平;猪链球菌2型国内分离株毒力相关蛋白的分析[J];微生物学报;2002年01期

4 胡晓抒,朱凤才,汪华,陈宋义,王广和,孙建中,华春涛,杨华富;人猪链球菌感染性综合征研究[J];中华预防医学杂志;2000年03期

5 徐淑菲,何孔旺,陆承平;猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达[J];中国人兽共患病杂志;2004年11期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 云水丽;张伟;刘武杰;张小荣;陈素娟;吴艳涛;彭大新;刘秀梵;;共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力研究[J];病毒学报;2009年06期

2 呼显生;李静姬;马玉敏;姜成;彭召玲;;猪源性链球菌分离鉴定及药敏试验[J];当代畜牧;2005年10期

3 徐伟荣,王跃进,王西平,郝炜,孙马;中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建[J];西北植物学报;2005年05期

4 李军,牛钟相;猪链球菌病研究进展[J];动物医学进展;2004年03期

5 熊毅;覃芳芸;白昀;朱伟;郭建刚;李华明;陆立权;邹联斌;刘棋;;猪链球菌2型广西GX01株Cps2J基因克隆与序列分析[J];动物医学进展;2006年11期

6 颜运秋;卿泰安;黎满香;刘珂;卢帅;郑元敬;;湖南省猪链球菌的分离与鉴定[J];动物医学进展;2009年04期

7 李茂林,黄健强,马荣超,陈木星,娄高明;2型猪链球菌病[J];饲料工业;2005年18期

8 倪晓彬;陈敏生;刘世明;何晓青;刘启才;董颀;赵路宁;;hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];广东医学;2010年03期

9 董国英,李敏,向华;人畜共患新病原——猪链球菌2型的研究进展[J];广东畜牧兽医科技;2005年05期

10 王全楚,申德林;重症猪链球菌感染的相关研究[J];国外医学.流行病学传染病学分册;2005年05期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 陈国强;唐泰山;邓碧华;张敬友;张常印;陆承平;;猪链球菌2型溶血素基因的检测[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 李学瑞;猪链球菌防治新技术研究[D];中国农业科学院;2011年

2 刘曼莉;猪链球菌2型感染宿主后宿主表达谱的分析研究[D];华中农业大学;2011年

3 刘翠权;广西395个规模猪场猪呼吸道疾病综合征的病原学调查及防控措施[D];南京农业大学;2011年

4 米立国;双基因共表达预防血管再狭窄的实验研究[D];河北医科大学;2002年

5 马有智;猪链球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表达[D];浙江大学;2003年

6 范红结;猪源链球菌类M蛋白基因的克隆、序列分析、表达及动物免疫试验[D];南京农业大学;2003年

7 田云;猪链球菌7型的分型与抗性的研究及猪链球菌2型可能的毒力基因的发现[D];南京农业大学;2003年

8 韦栋平;共表达新城疫病毒融合蛋白基因和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2004年

9 孙蕾;外源基因插入不同复制非必需区影响重组鸡痘病毒抵抗母源抗体干扰的能力[D];扬州大学;2005年

10 陈素娟;用不同鸡痘病毒载体构建单表达或双表达抗H5和H9亚型禽流感的重组疫苗及其免疫效力[D];扬州大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 郝春燕;猪链球菌2型的分离鉴定及PCR检测[D];西北农林科技大学;2010年

2 许晓燕;猪链球菌对四环素耐药机制的研究及耐药基因三重PCR检测方法的建立[D];山东农业大学;2011年

3 赵丽静;VEGF164与EGFP双基因共表达的优化新型HIV-1慢病毒载体的构建及表达[D];吉林大学;2011年

4 关继羽;抗羊布氏杆菌病转基因细胞系的构建及相关问题的研究[D];吉林大学;2011年

5 靳志栋;PPE68/Ipr1基因的表达、鉴定及初步应用[D];重庆医科大学;2011年

6 张静;猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的生物学功能初探及串联蛋白的免疫保护评价[D];上海交通大学;2012年

7 王建;猪链球菌病疫苗的研制[D];南京农业大学;2001年

8 方绍庆;猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化、化学修饰及其基因检测与分析[D];南京农业大学;2002年

9 谈国蕾;猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因在原核和真核系统中的表达[D];南京农业大学;2003年

10 马清霞;猪链球菌病PCR诊断技术及SS2毒力因子单克隆抗体的研制[D];南京农业大学;2004年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王阁;超抗原与中毒性休克综合征[J];国外医学.流行病学传染病学分册;1994年03期

2 阎世德，姜淑贤，陆桂珍;国外A群链球菌病的流行病学研究[J];疾病监测;1996年01期

3 欧瑜,陆承平;检测猪链球菌2型毒力相关蛋白的ELISA法的建立[J];南京农业大学学报;2001年02期

4 姚火春,陈国强,陆承平;猪链球菌1998分离株病原特性鉴定[J];南京农业大学学报;1999年02期

5 李永兴,胡长征,王继文,李久蒂;介绍一种新的半干式免疫转渍法[J];生物化学与生物物理进展;1991年03期

6 姜淑贤，，尚德秋;链球菌中毒性休克综合征和超级抗原[J];中国公共卫生;1996年02期

7 倪艳秀,何孔旺,王继春,何家惠,还红华,陆承平,姚火春;检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立[J];中国预防兽医学报;2001年01期

8 张慧英,高杰英,罗振革,刘永全,彭虹,陈志华,孔祥英;小鼠MAdCAM-1分子剪切体的克隆及表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;2000年04期

9 倪艳秀,何孔旺,王继春,何家惠,还红华,吕立新,陆承平,姚火春;猪链球菌2型的PCR快速检测[J];中国兽医学报;2002年05期

10 欧瑜,陆承平;猪链球菌2型胞外蛋白因子基因片段的克隆与表达[J];中国兽医学报;2003年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐公义;王海丽;葛长城;王长军;唐家琪;;SS2人源分离株ZYH24 EF的表达纯化及其单克隆抗体的制备[J];中国人兽共患病学报;2009年01期

2 曾巧英,陆承平;猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白的黏附作用[J];南京农业大学学报;2002年04期

3 倪艳秀,何孔旺,何家惠,王继春,俞正玉,侯继波,吕立新;猪链球菌2型SS_2-1和SS_2-H株的培养稳定性检测[J];中国兽医科技;2002年04期

4 张淑伟;鲁成武;;猪链球菌2型的致病机制[J];生命的化学;2006年02期

5 朱僧;孙长江;雷连成;韩文瑜;;猪链球菌2型毒力相关因子研究进展[J];河北科技师范学院学报;2010年04期

6 高巍;韩文瑜;雷连成;高尚庆;杜崇涛;;猪链球菌2型的分离与鉴定[J];中国生物制品学杂志;2007年06期

7 倪艳秀,何孔旺,王继春,何家惠,还红华,陆承平,姚火春;检测猪链球菌2型胞外因子(EF)的PCR方法的建立[J];中国人兽共患病杂志;2001年04期

8 王海丽;王长军;陆承平;潘秀珍;唐家琪;;猪链球菌2型人源分离株截短的溶菌酶释放蛋白基因的克隆及原核表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年02期

9 徐公义;王海丽;葛长城;王长军;唐家琪;;猪链球菌2型人源株MRP的表达及其单克隆抗体的制备与应用[J];中国兽医学报;2009年07期

10 葛长城;王海丽;徐公义;;猪链球菌2型胞外因子的融合表达及多克隆抗血清的制备[J];湖北农业科学;2009年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 倪艳秀;何孔旺;王继春;何家惠;还红华;陆承平;姚火春;;检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

2 盛伟华;谢宇锋;缪竞诚;顾范博;朱晔涵;陈华昕;杜贤荣;杨吉成;;Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体构建及表达[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

3 高尚庆;雷连成;;猪链球菌2型主要毒力因子研究进展[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年

4 谢宇锋;盛伟华;缪竞诚;顾范博;杨吉成;;Ad-ING4-PolyA-Promoter-IL-24双基因共表达载体构建及表达[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

5 何孔旺;倪艳秀;王继春;何家惠;吕立新;候吉波;还红华;邵国青;陆承平;姚火春;;猪链球菌2型江苏分离株毒力因子MRP与EF基因序列分析[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

6 倪艳秀;何孔旺;王继春;何家惠;吕立新;陆承平;姚火春;;PCR检测和定型猪链球菌2型的研究[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年

7 齐

本文编号：1169623